MicroRNA Protocols (Methods in Molecular Biology) pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:Humana Press

作者:Ying, Shao-Yao 编

出品人:

页数:272

译者:

出版时间:2006-04-01

价格:USD 119.00

装帧:Hardcover

isbn号码:9781588295811

丛书系列:

图书标签:

• RNA
• 生物
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实用分子生物学技术手册：从基础到前沿的实验指南 本书简介 本书是一部全面、深入的实验技术手册，旨在为分子生物学研究人员、生物技术专业学生以及在生命科学领域工作的技术人员提供一套严谨、可靠且操作性极强的实验方案。内容聚焦于当前生命科学研究中最常用、最核心的几大技术领域，从核酸和蛋白质的提取、纯化，到基因克隆、表达调控，再到高通量测序和先进的成像技术，力求覆盖从基础研究到应用开发的全流程技术需求。 本书的编写遵循“实用性至上”的原则，每项技术都配有详尽的步骤分解、必要的试剂和设备清单，以及关键步骤的优化技巧和潜在问题的排查指南。我们深知实验的成功与否往往取决于细节处理，因此在描述中特别强调了操作的精确性和可重复性。 第一部分：核酸操作的基石 第一章：细胞与组织样本的准备及核酸提取 成功的分子生物学实验始于高质量的起始材料。本章详细介绍了从不同来源（细菌、酵母、植物组织、动物组织、培养细胞）高效提取基因组DNA、质粒DNA和总RNA的优化方案。 组织匀浆与裂解技术： 探讨了液氮研磨、机械匀浆和酶消化法在不同组织类型中的适用性与效率比较。重点阐述了如何最大程度地保持RNA的完整性，包括RNase酶污染的预防策略。 有机溶剂提取法（酚-氯仿法）： 提供了经典酚-氯仿抽提的精确操作流程，包括相分离的判断标准和去蛋白步骤的改进，以获得高纯度的核酸。 商业试剂盒的优化使用： 对市面上主流的基于硅胶柱的DNA/RNA提取试剂盒进行了性能评估，并提供了延长柱子吸附时间、调整洗脱液pH值等提高得率和纯度的实用技巧。 核酸纯度与定量分析： 详细介绍了使用紫外分光光度计（Nanodrop）和荧光定量（Qubit）技术对核酸质量（A260/A280, A260/A230比值）和浓度进行准确测定的标准流程。 第二章：PCR及其衍生技术 聚合酶链式反应（PCR）是分子生物学的核心技术，本章全面覆盖了从基础到复杂应用的各种PCR技术。 标准与热启动PCR： 阐述了构建高效PCR反应体系的要素（dNTPs, MgCl2浓度、引物设计原则），并比较了传统热启动与化学/酶法热启动的优缺点。 定量实时荧光PCR（qPCR/RT-qPCR）： 深入讲解了荧光素酶报告基因法（SYBR Green）和 TaqMan 探针法的原理与实践。重点讨论了标准曲线的建立、内参基因的选择、溶解曲线分析以及数据分析方法（如$2^{-DeltaDelta C_T}$法）。 高保真PCR与长片段扩增： 介绍了含有校对功能的DNA聚合酶的应用，以及如何通过优化退火温度和使用特殊的缓冲液体系来成功扩增超过10kb的DNA片段。 反转录（RT）技术： 详细描述了基于随机引物、寡聚dT引物和基因特异性引物（GSP）的反转录过程，并针对不同RNA模板的丰度和质量给出了选择建议。 第二部分：基因操作与表达调控 第三章：分子克隆与载体构建 本章是构建基因工程重组体必不可少的指南。 限制性内切酶消化与末端修饰： 提供了精确计算酶切位点、优化反应时间以避免“星号活性”的经验。详述了粘性末端和平末端的制备方法，包括末端加尾和退火合成。 DNA连接（Ligation）技术： 比较了T4 DNA连接酶的经典用途与快速连接（如Ta-cloning）的效率。重点分析了载体与插入片段的摩尔比对连接效率的影响。 基于同源重组的克隆技术（Gateway & In-Fusion）： 详细介绍了目前主流的无缝克隆方法，包括反应体系的配比、菌株的选择以及如何处理多片段的定向插入。 大片段克隆与BAC/YAC载体： 针对基因组文库构建等大片段DNA操作，提供了酵母人工染色体（YAC）和细菌人工染色体（BAC）的制备和筛选策略。 第四章：蛋白质表达、纯化与鉴定 从基因到功能蛋白的转化是生物技术的核心环节。 原核与真核表达系统的选择： 针对不同目标蛋白的翻译后修饰需求，对比了E. coli（BL21系列）、昆虫细胞（Sf9/High-Five）和哺乳动物细胞（CHO/HEK293）的表达优劣势。 诱导表达与包涵体处理： 提供了优化诱导剂浓度和温度梯度的方案，以提高可溶性蛋白的得率。详细讲解了包涵体的复性过程，包括尿素/盐酸胍的复性缓冲液配方和逐步透析技术。 亲和层析技术（Affinity Chromatography）： 详述了镍离子亲和层析（His-tag）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）以及FLAG标签蛋白的纯化流程。特别关注了洗脱条件和标签切除酶的优化。 蛋白质鉴定与Western Blotting： 介绍了SDS-PAGE的优化上样技术，以及免疫印迹（Western Blot）中一抗/二抗的孵育条件、化学发光和荧光检测方法的比较。 第三部分：基因调控与细胞生物学技术 第五章：基因沉默与过表达策略 本章聚焦于利用核酸技术干预基因表达，是功能验证的关键。 siRNA/shRNA的设计与递送： 提供了设计高特异性小干扰RNA（siRNA）的算法指导，并详细对比了脂质体转染、电穿孔和病毒载体介导的shRNA稳定表达系统的操作规程。 CRISPR/Cas9基因编辑系统： 详细介绍了sgRNA的合成与优化，Cas9核酸酶的递送方式（质粒、mRNA、RNP复合物），以及靶向编辑的验证方法（如T7 E1酶分析和测序）。 报告基因分析（Luciferase Assay）： 阐述了如何构建驱动报告基因的报告质粒，以及双荧光素酶体系在转录因子活性检测中的应用，包括归一化处理。 第六章：细胞培养与生物成像 高质量的细胞培养是所有下游分析的基础。 无菌操作与细胞传代： 强调了生物安全柜的正确使用规范，以及原代细胞、永生化细胞株的冻存、复苏和传代技巧。 贴壁与悬浮细胞的优化培养基配制： 针对不同细胞系的营养需求，提供了血清批次筛选和无血清培养体系的建立指南。 细胞增殖与活力检测： 介绍了MTT、CCK-8以及PrestoBlue等方法的原理和定量分析标准。 免疫荧光（IF）与共聚焦显微镜技术： 详细讲解了细胞固定、通透化、封闭和抗体孵育的完整流程。重点指导了多重染色实验中荧光通道的设置和抗体兼容性测试。 第七章：蛋白质互作与功能分析 理解蛋白质在细胞网络中的相互作用至关重要。 酵母双杂交（Y2H）系统的应用： 涵盖了构建实验文库、酵母菌株的转化、筛选阳性克隆以及验证互作的详细步骤。 Co-IP（免疫共沉淀）技术： 提供了优化抗体质量、选择合适的裂解缓冲液（保持蛋白构象）以及Western Blot鉴定相互作用蛋白的实用建议。 GST-Pull Down实验： 详细说明了如何制备融合蛋白珠，优化洗脱条件，并降低非特异性背景的策略。 本书旨在成为分子生物学实验桌上不可或缺的“工具书”，帮助研究人员减少摸索时间，提高实验效率和数据可靠性。

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总而言之，《MicroRNA Protocols (Methods in Molecular Biology)》是一本非常全面、实用且权威的microRNA研究指南。无论你是初学者还是有经验的研究者，都能从中获益匪浅。这本书不仅提供了各种先进的实验技术，还深入讲解了其背后的原理和应用。它是我进行microRNA研究不可或缺的工具书，也为我未来的研究方向提供了很多启发。 这本书的价值在于它提供了一种系统性的学习和研究方法。它不是简单地告诉你“怎么做”，而是引导你去思考“为什么这么做”，并且告诉你“如何做得更好”。这种科学的研究态度和方法论的培养，对于任何一个希望在科研领域有所建树的研究者来说，都是非常重要的。我非常推荐这本著作给所有对microRNA感兴趣的同行们。

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这本书对于理解microRNA的生物合成和降解过程也提供了详尽的介绍。我非常好奇microRNA是如何从前体分子加工成熟，以及它们是如何在细胞内被降解或进一步修饰的。书中详细介绍了Dicer、Drosha等关键酶的作用机制，以及RISC复合物在microRNA介导的基因沉默中的作用。它还讨论了调控microRNA生物合成和降解的一些因素，例如转录因子和RNA结合蛋白。 我尤其喜欢书中关于microRNA修饰（如A-to-I编辑）的章节。它解释了这些修饰如何影响microRNA的稳定性、结合能力和靶标特异性，以及这些修饰在疾病发生发展中的作用。书中还提供了相关的实验技术，例如如何检测microRNA的修饰，以及如何研究修饰对microRNA功能的影响。这让我对microRNA的调控机制有了更全面的认识。

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在microRNA与疾病相关性的研究方面，这本书也提供了非常有价值的信息。它不仅涵盖了microRNA在癌症、心血管疾病、神经系统疾病等多种疾病中的作用，还提供了相关的实验技术和分析方法。例如，在肿瘤研究中，书中介绍了如何检测肿瘤组织和血液中的microRNA表达谱，以及如何利用这些信息进行早期诊断和预后评估。 我对书中关于miRNA profiling（microRNA谱分析）的讲解特别感兴趣。它详细介绍了各种高通量测序和芯片技术在microRNA谱分析中的应用，以及如何处理和分析大量的microRNA表达数据。书中还探讨了如何通过机器学习等方法来识别与疾病相关的microRNA生物标志物，并解释了这些生物标志物在临床诊断和治疗中的潜在应用。这为我理解microRNA在疾病诊断和治疗中的作用提供了更深入的视角。

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这本《MicroRNA Protocols (Methods in Molecular Biology)》简直是microRNA研究领域的宝藏！作为一个刚刚入门的研究者，我常常被各种层出不穷的实验技术弄得眼花缭乱，恨不得有本“武功秘籍”能指点迷津。这本书恰好就满足了我的需求。它不仅仅是简单地罗列实验步骤，更重要的是，它深入浅出地讲解了每种方法背后的原理，为什么这样做？每一步的关键在哪里？这对于我理解实验设计、优化条件，甚至在实验遇到问题时进行故障排除都起到了至关重要的作用。 我特别喜欢书中关于microRNA提取和纯化的章节，这部分是后续所有实验的基础。书中详细介绍了从不同样本类型（如组织、细胞、血浆）中提取microRNA的各种方法，包括使用Trizol、柱式纯化以及一些更简便的试剂盒。每种方法的优缺点、适用范围以及操作时的注意事项都讲解得非常清楚。书中还提供了大量图示和流程图，使得即使是没有经验的人也能照猫画虎地完成实验。而且，它还特别强调了RNA的完整性和避免降解的重要性，这对于microRNA研究来说是绝对的关键。我曾经因为RNA质量不高导致下游的qRT-PCR结果不理想，这本书的指导让我恍然大悟，原来之前的操作细节还有待改进。

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另外，关于microRNA的定量分析，书中提供了多种先进的技术，如qRT-PCR、microRNA芯片以及下一代测序（NGS）。我对qRT-PCR部分印象尤其深刻，它不仅讲解了SYBR Green法和TaqMan探针法的原理和操作，还详细讨论了内参基因的选择、数据分析方法（如ΔΔCt法）以及如何避免实验误差。书中还给出了一些实用的建议，比如如何设计有效的引物，如何进行扩增效率的优化。这些细节上的指导，对于确保实验结果的准确性和可重复性非常有帮助。 我尤其欣赏的是，这本书没有仅仅停留在理论层面，而是提供了大量的“经验之谈”，这些都是在实际操作中才能体会到的宝贵财富。例如，在进行microRNA定量时，不同样本的处理方式、RNA的起始量、以及qPCR仪器的设置都会影响最终的结果。书中针对这些潜在的“坑”都提前给出了警示和解决方案。读完这部分，我对如何设计一个可靠的microRNA定量实验有了更清晰的认识，也更有信心去执行。

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这本书的另一个亮点在于它对新技术和新方法的及时更新。microRNA领域的研究发展非常迅速，新的技术和工具层出不穷。而这本书能够紧跟学术前沿，及时收录和介绍最前沿的实验技术和研究进展，这使得它始终保持着很高的参考价值。 例如，书中关于circRNA（环状RNA）与microRNA相互作用的研究部分，就非常具有前瞻性。circRNA作为一种新发现的RNA分子，已经被证明在microRNA调控中扮演着重要的角色，能够作为microRNA的海绵，从而影响下游基因的表达。这本书详细介绍了检测circRNA-miRNA相互作用的实验方法，包括RNApull-down、ChIRP-seq等，这对于我们理解更复杂的RNA调控网络非常有帮助。

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书中关于microRNA在细胞培养和转染的章节也为我提供了极大的帮助。在研究microRNA的功能时，我们常常需要在细胞模型中过表达或沉默特定的microRNA。这本书详细介绍了各种转染试剂和载体，包括质粒、shRNA、以及miRNA mimics和inhibitors。它还讨论了不同转染方法的效率、毒性和适用性，以及如何优化转染条件以获得最佳效果。 我特别赞赏书中关于miRNA mimics和inhibitors的设计和使用的部分。它解释了这些分子如何模拟或抑制内源性miRNA的活性，以及如何选择合适的序列和浓度。书中还提供了一些实用的技巧，例如如何监测转染效率，以及如何验证miRNA的过表达或沉默是否成功。这些细节对于确保实验的准确性和可靠性至关重要，避免了因为转染效率不高或者非特异性效应而导致的研究偏差。

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这本书在microRNA的功能研究方面也提供了非常全面的指导。我重点关注了关于microRNA靶基因预测和验证的部分。书中详细介绍了各种生物信息学工具，如TargetScan、miRanda、DIANA-TarBase等，以及如何利用这些工具预测潜在的microRNA靶基因。更重要的是，它还提供了实验验证的方法，包括报告基因实验、Western blot、以及RIP-seq等。 我特别喜欢书中对报告基因实验的详细讲解，这是一种非常直观且易于操作的方法来验证microRNA与靶基因mRNA的结合。书中不仅解释了实验原理，还详细介绍了如何构建载体、转染细胞、以及如何设置对照组。它还提供了关于结果分析的一些注意事项，比如如何判断阳性结果，以及如何排除假阳性。这些详细的步骤和解释，让我能够更自信地去设计和执行自己的验证实验。

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这本书的排版和语言风格也让我感到非常舒适。每章都有清晰的标题和副标题，实验步骤的描述也十分清晰易懂，并且配有相应的图示和表格，这大大降低了阅读的难度。书中使用的语言也比较专业，但并不晦涩难懂，即使是初学者也能较快地掌握其中的内容。 我特别喜欢书中在介绍完每种技术之后，都会有“Troubleshooting”或者“Tips”这样的部分。这些小贴士往往是作者在长期的研究实践中总结出来的经验，能够帮助我们规避一些常见的错误，或者更有效地解决实验中遇到的问题。例如，在进行Western blot时，书中就给出了一些关于抗体选择、封闭条件设置以及显影剂使用方面的实用建议，这些都对我后期的实验非常有帮助。

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对于microRNA的体内研究，这本书也提供了一些前沿的实验技术。我非常感兴趣的是关于microRNA在动物模型中调控的研究。书中详细介绍了如何通过慢病毒、腺病毒载体等将microRNA或其拮抗剂导入动物体内，以及如何评估其在疾病模型中的作用。它还提到了microRNA在生物样本中的检测，例如在血清、尿液等体液中的microRNA检测，以及其作为生物标志物的潜力。 我尤其对书中关于miRNA in vivo delivery的讨论印象深刻。它详细介绍了各种递送系统的原理和应用，包括脂质体、纳米颗粒、以及外泌体等。书中还探讨了这些递送系统在靶向性、稳定性和生物相容性方面的优势和劣势，以及如何根据不同的研究目的选择合适的递送系统。这些信息对于我今后开展体内microRNA调控的研究非常有指导意义。

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算是整理了一下的论文集，很详细

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