Rapid Cycle Real-Time PCR pdf epub mobi txt 电子书下载 2026

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出版者:Springer

作者:G. Burg

出品人:

页数:408

译者:

出版时间:2001-2-15

价格:USD 99.95

装帧:Spiral-bound

isbn号码:9783540667360

丛书系列:

图书标签:

Real-Time PCR
qPCR
Molecular Biology
Diagnostics
PCR
Genetics
Biotechnology
Laboratory Techniques
Medical Laboratory
Virology

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具体描述

The first comprehensive treatise on Rapid Cycle Real-Time PCR. With amplification times of 15-30 minutes of on-line detection and analysis, nucleic acid quantification of mutation analysis finally becomes a routine, powerful and rapid method. Focusing primarily on the LightCycler, an instrument that combines Rapid Cycle PCR with fluorescent monitoring, this technology provides convenient analysis by melting temperatures. PCR products can be identified by product Tm, and single base mismatches can easily be genotyped by probe Tm. Methods chapters detail the theory behind quantification of mutation analysis; the design of synthesis of fluorescent hybridization probes of the preparation of template DNA. Application chapters apply nucleid acid quantification to infectious organisms of intracellular messengers and mutation detection to somatic of acquired mutations.

《分子诊断学前沿：高通量测序与数字PCR技术解析》作者： [此处留空，或填写一个虚构的作者姓名] 出版社： [此处留空，或填写一个虚构的科学出版社名称] --- 图书内容简介本书旨在全面、深入地探讨当代分子诊断领域中两项革命性技术——高通量测序（Next-Generation Sequencing, NGS）和数字聚合酶链式反应（Digital PCR, dPCR）的理论基础、技术细节、应用拓展及其在临床与科研前沿的实践。本书的叙述侧重于对这些复杂技术的系统梳理与操作逻辑的清晰阐释，力求为生命科学研究人员、临床检验专业人员以及生物技术工程师提供一本兼具理论深度与实践指导意义的参考手册。第一部分：高通量测序技术（NGS）的深度剖析本部分将分子诊断的焦点引向大规模平行测序技术的演进与现状。我们首先回顾了第一代测序技术（Sanger法）的局限性，随后将重点解析当前主流的NGS平台，包括Illumina的边合成边测序（Sequencing by Synthesis, SBS）原理，Thermo Fisher Scientific的半导体测序（Ion Torrent）机制，以及Pacific Biosciences（PacBio）和Oxford Nanopore Technologies（ONT）等代表的长读长测序技术（Long-Read Sequencing）。 1.1 NGS技术平台原理详解：详细描述了从文库制备、簇生成（Bridge Amplification 或 Emulsion PCR）、序列读取到数据分析的全流程。对于SBS技术，本书将剖析荧光可逆终止子（Reversible Terminators）的工作机制及其对测序深度和准确性的影响。对于半导体测序，重点阐释氢离子释放与pH值变化在信号捕获中的作用。在长读长技术部分，将深入探讨单分子实时测序（Single-Molecule Real-Time, SMRT）和纳米孔测序（Nanopore Sequencing）如何突破传统短读长的限制，在分析复杂基因组结构变异、重复序列和表观遗传学标记方面展现出的独特优势。 1.2 基因组学应用：本章探讨了NGS在全基因组测序（WGS）、全外显子组测序（WES）中的应用，并细致区分了其在覆盖度、成本效益和数据完整性方面的考量。特别关注了针对特定目标区域的重测序（Targeted Sequencing）和外显子组捕获策略的设计与优化。 1.3 转录组学与宏基因组学：深入分析RNA测序（RNA-Seq）如何实现对基因表达水平的定量分析、可变剪接事件的鉴定以及新型转录本的发现。在宏基因组学领域，本书讲解了shotgun宏基因组测序（Shotgun Metagenomics）相较于基于16S rRNA的分析的优势，以及如何通过生物信息学工具重建微生物群落的功能潜力。 1.4 临床转化与生物信息学挑战：强调了从海量测序数据中提取有效临床信息的重要性。内容涵盖了序列比对、变异检测（包括SNVs、Indels和结构变异SVs）、变异注释、以及临床意义判读的标准化流程。同时，对数据存储、云计算资源需求和数据安全与隐私保护进行了探讨。 --- 第二部分：数字聚合酶链式反应（dPCR）的精确量化本部分聚焦于数字PCR技术，作为一种绝对定量的新兴方法，dPCR以其无与伦比的灵敏度和精确性在微量核酸检测中占据了核心地位。本书将dPCR定位为一种计数而非比较的定量技术，并系统阐述其实现高精度的物理基础。 2.1 dPCR的基本原理与平台分类：详细解释了dPCR的核心概念：将样本反应体系随机分配到成千上万个独立的微反应室中（如微滴、微孔或液滴），进行PCR扩增，最后通过计数阳性/阴性反应室的数量，运用泊松分布统计学原理计算出初始模板的绝对浓度。本书对比了主流的dPCR平台，包括基于微流控芯片的液滴数字PCR（ddPCR，如Bio-Rad QX系列）和基于微孔阵列的平台，分析了它们在油包水乳液稳定性、分配均匀性和通量上的差异。 2.2 实验设计与优化：强调了在dPCR实验中，引物/探针设计、反应体系组分（如缓冲液、酶的选择）对扩增效率和背景噪音的影响。特别讨论了如何通过控制分区效率（Partitioning Efficiency）和确保单分子在每个分区内的统计学独立性来最大化测量的准确性。 2.3 dPCR在低丰度目标检测中的应用：重点展示dPCR在临床和科研中的“金标准”应用场景。这包括：液体活检（Liquid Biopsy）：对循环肿瘤DNA（ctDNA）中微小残留病灶（MRD）的敏感监测，特别是在评估癌症治疗反应和监测复发方面。病毒载量测定：针对HIV、HBV、HCV等病毒，在极低拷贝数下的绝对定量，尤其适用于免疫抑制患者或治疗早期阶段的监测。基因拷贝数变异（CNV）分析：使用双重或多重dPCR设置，精确测定基因拷贝数的倍性，尤其是在异质性样本中。 2.4 融合性分析：NGS与dPCR的互补性：本部分收尾部分强调了NGS（擅长高通量筛查和发现新变异）与dPCR（擅长极低丰度变异的绝对验证和定量）在现代分子诊断流程中的协同作用。讨论了如何利用NGS初步筛选出潜在的体细胞突变，再利用高度敏感的dPCR技术进行临床随访和疗效评估。 --- 结论与展望本书总结了高通量测序技术在基因组学研究中的不可替代性，以及数字PCR技术在解决“大海捞针”式定量难题上的突破。展望未来，本书预测了这两大技术将进一步整合，朝着更快速、更便携、更高通量的方向发展，特别是结合人工智能辅助的生物信息学分析，将推动分子诊断进入更精准的个体化医疗时代。本书内容翔实，图文并茂，为专业人士提供了掌握和应用这些前沿技术的坚实理论基础和操作指南。