Molecular Diagnostic Pcr Handbook pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:Kluwer Academic Pub

作者:Viljoen, Gerrit J. (EDT)/ Nel, Louis H. (EDT)/ Crowther, John R. (EDT)

出品人:

页数:307

译者:

出版时间:

价格:1823.00元

装帧:HRD

isbn号码:9781402034039

丛书系列:

图书标签:

• PCR
• 分子诊断
• 分子生物学
• 医学检验
• 临床诊断
• 核酸检测
• 疾病诊断
• 实验室技术
• 生物技术
• 医学

精粹分子生物学技术指南：从基础到前沿 导言：深入理解生命科学的核心工具 在当代生物医学研究和临床诊断领域，对分子水平生命现象的精确解析已成为核心驱动力。本书旨在为科研工作者、临床医生、技术人员以及生物技术专业的学生提供一本全面、深入且高度实用的技术手册。我们聚焦于分子生物学领域最关键且应用最广泛的技术体系，旨在构建一个从理论基石到尖端应用的知识桥梁，帮助读者高效掌握并优化实验流程，从而推动从基础研究到疾病诊断的各个环节。 本书的核心关注点在于那些构建现代分子生物学实验体系的支柱技术，而非单一的聚合酶链式反应（PCR）方法的深度挖掘。我们将宏观地审视整个分子诊断和基因组学研究的生态系统，确保读者对各个环节的相互作用有清晰的认识。 第一部分：分子生物学基础与核酸操作的基石 在深入探讨复杂技术之前，掌握核酸（DNA和RNA）的提取、纯化、定量和定性分析是至关重要的第一步。本部分将详尽阐述这些基础操作的原理、优化策略及其在实际应用中可能遇到的挑战。 1. 高质量核酸的获取与纯化： 详细对比不同样本类型（血液、组织、植物、微生物）中核酸的提取方法。重点解析基于硅胶柱亲和层析、酚氯仿萃取以及磁珠分离技术的优缺点。我们将深入探讨影响最终产物质量的关键因素，包括细胞裂解效率、蛋白酶K消化条件、洗脱体积的选择，以及如何有效去除抑制剂（如血红素、多糖、酚类物质）以确保下游反应的成功。对于RNA的提取，特别关注RNase污染的防控和反转录酶的活性维护。 2. 核酸的定量与质量评估： 掌握准确的定量是后续所有实验的基础。本章将详细介绍分光光度法（Nanodrop/Spectrophotometer）的原理及其局限性，特别是A260/A280和A260/A230比值的解读。更侧重于荧光染料法（如Qubit）在精确度上的优势，以及通过电泳和毛细管电泳仪对核酸完整性和大小的评估方法。 3. 分子克隆学与重组DNA技术： 尽管现代技术发展迅速，重组DNA的构建仍是许多研究的基石。本书将系统介绍限制性内切酶的酶切特性、粘性末端与平末端的操作策略，以及连接反应（Ligation）的条件优化。对于载体的选择（质粒、噬菌体、病毒载体）及其在不同宿主（大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞）中的应用将进行深入探讨。此外，基因编辑技术如CRISPR/Cas9系统的载体构建与靶向策略，也将作为现代分子克隆的前沿内容被介绍。 第二部分：基因组与转录组的分析技术 本部分将聚焦于对生物体遗传物质及其表达产物的全面分析工具，这些技术共同构成了对生命活动机制的深入洞察。 4. 核酸电泳技术精要： 详细阐述琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的原理、胶的配制、电压控制以及上样策略。重点分析如何通过调整凝胶浓度来优化分离效率，并讨论变性与非变性电泳在区分DNA、RNA和蛋白质上的应用区别。 5. 杂交技术：从经典到高通量： 经典Southern Blotting和Northern Blotting技术，尽管操作繁琐，但在基因组定位和特定RNA丰度检测中仍具有不可替代的价值。本章将细致描述探针的标记（放射性、地高辛、荧光标记）、膜的选择与转移技术，以及信号的显影和分析。此外，与FISH（荧光原位杂交）技术在染色体定位方面的应用也将被纳入讨论。 6. 高通量测序技术（NGS）概览： 这一部分将概述新一代测序技术（NGS）的整体框架，区别于侧重单一扩增的技术。我们将涵盖从文库构建（片段化、接头连接）到测序平台（Illumina平台为主）的流程。重点介绍全基因组测序（WGS）、全外显子组测序（WES）以及RNA测序（RNA-Seq）在数据产出、分析流程和应用潜力上的差异。对数据质量控制和基础生物信息学解读的初步指导将被提供。 第三部分：蛋白质组学与免疫学检测技术 分子诊断和生物医学研究的终点往往指向蛋白质功能和表达，因此，对蛋白质进行准确、灵敏的检测至关重要。 7. 蛋白质分离与检测： 详细讲解SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）的原理，包括样品处理、胶的梯度设计、电泳迁移率与分子量的关系。在此基础上，深入介绍Western Blotting（蛋白质印迹法）的完整流程，包括转移条件的优化、一抗/二抗的选择、封闭缓冲液的配制、以及信号的化学发光和荧光检测。 8. ELISA与酶联免疫吸附测定法： ELISA是临床和基础研究中应用最广泛的定量分析工具之一。本书将详述间接法、夹心法和竞争法的操作流程，并提供提高其灵敏度和特异性的实验技巧，如抗原/抗体包被条件的标准化和底物反应时间的精确控制。 9. 免疫组化与免疫荧光： 这两种技术用于在组织切片和细胞水平上定位和定量特定蛋白。我们将讨论组织固定、抗原修复（加热/酶消化）的必要性、一抗的滴定优化，以及如何通过双重或多重荧光标记技术实现对多个标志物的共定位分析，特别关注非特异性背景的排除策略。 第四部分：实验的质量控制、数据分析与生物安全 高质量的实验结果来源于严谨的流程控制和恰当的数据解读。 10. 实验质量控制与故障排除： 汇编分子生物学实验中常见的“陷阱”和系统性误差来源。例如，如何识别和解决PCR扩增效率低下的问题（不涉及PCR本身原理），如何判断样本降解，以及如何通过实验对照（阳性/阴性对照）来验证实验的可靠性。 11. 生物安全与规范操作： 强调在处理高风险生物材料（如病毒载体、人源样本）时的实验室生物安全等级（BSL）要求。涵盖标准操作流程（SOP）的建立、废弃物分类处理、以及个人防护装备的正确使用，确保实验过程符合行业规范。 总结与展望： 本书超越了单一技术层面的讲解，旨在提供一个涵盖分子生物学核心技术领域的综合平台。通过对核酸提取、分离、克隆、杂交、蛋白质分析及质量控制等关键环节的系统梳理与深度解析，读者将能够独立设计、执行并优化复杂的分子生物学实验方案，从而在基因组学、蛋白质组学以及疾病分子机制探索的道路上稳步前行。本书是通往精准生物医学实践的必备参考书。

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