Introduction to Electron Microscopy for Biologists, Volume 88

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出版者:
作者:Terry D. Allen
出品人:
页数:560
译者:
出版时间:2008-7
价格:1204.00 元
装帧:
isbn号码:9780123743206
丛书系列:
图书标签:
  • Electron Microscopy
  • Biology
  • Microscopy
  • Cell Biology
  • Biophysics
  • Methods
  • Techniques
  • Imaging
  • Life Sciences
  • Research
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Introduction to Electron Microscopy for Biologists is ideal for the scientist who may be considering electron microscopy as a tool to extend molecular, biochemical, or light microscope observations to the next level of structural information, only available by electron microscopy. Each chapter briefly surveys the present state of structural information in a particular area, be it an individual but widely occurring molecule such as actin or collagen, together with the methods for visualization, either as an extracted and purified entity, or in situ within its biological context. Not only is this book an introduction to electron microscopy in general, but it is also useful for those within the field who wish to move to a different area of expertise, for instance an approach based on rapid freezing, rather than more conventional protocols. This should be a first choice reference for any biologist wanting to know what does it look like across the full spectrum of cell and molecular biology of life science.

*Illustrates the advantages of electron microscopy and the protocols required for fine structural visualization of individual molecules upwards, ranging from mammalian tissues to experimental organisms.

*Comprehensive chapters cover both structural information on each area as well as the protocols themselves

*Includes methods covering specific labeling, as well as methods for quantification and three dimensional reconstruction from molecular to tissue levels.

聚焦生物学研究的现代技术:引言与实践 本书将带您踏上一段探索生物世界微观奥秘的旅程,重点介绍那些对现代生物学研究至关重要的成像技术。我们不仅会深入探讨这些强大工具背后的基本原理,还将重点关注它们在不同生物学领域中的实际应用。 第一部分:成像技术的基石 显微镜的进化与分类: 从最早的光学显微镜到如今精密的电子显微镜,我们将梳理显微技术的发展脉络,理解不同类型显微镜的优势与局限。这部分内容将为后续的深入探讨奠定基础,帮助读者构建一个清晰的学科框架。 光的物理学原理: 深入理解光与物质的相互作用是掌握光学成像技术的关键。我们将详细阐述光的衍射、折射、干涉和散射等现象,以及它们如何影响图像的形成和质量。通过理解这些基本物理原理,读者将能更好地理解显微镜的工作机制,并学会如何优化成像参数以获得最佳效果。 电子的波粒二象性与电子光学: 电子显微镜的出现是生物成像领域的一大飞跃。本部分将解释电子的波粒二象性,并阐述电子束如何通过电磁透镜聚焦和成像。我们将深入剖析电子与物质的相互作用,例如透射、散射和二次电子的产生,这些都直接影响着最终图像的形成。 第二部分:核心成像技术详解 透射电子显微镜 (TEM): TEM因其卓越的分辨率,能够揭示细胞器、病毒颗粒甚至分子结构的精细细节。我们将详细介绍TEM的组件、工作原理、样品制备的关键技术(如超薄切片、负染、免疫金标记),以及如何解读TEM图像以获取有价值的生物学信息。特别地,我们将讨论如何通过不同衬度模式(如明场、暗场)来增强特定结构的可见性。 扫描电子显微镜 (SEM): SEM以其能够提供样品表面三维成像的能力而著称,这对于观察细胞形态、组织结构和生物材料的表面特征至关重要。我们将详细介绍SEM的工作原理,包括二次电子、背散射电子的成像机制,以及样品处理(如干燥、喷金)的步骤。本书将指导读者如何利用SEM来研究细胞的表面拓扑结构、细胞间的相互作用以及宏观生物体的表面特征。 原子力显微镜 (AFM): AFM作为一种非破坏性的表面成像技术,能够以原子尺度解析生物分子的三维结构和力学性质。我们将深入讲解AFM的工作原理,包括探针与样品之间的范德华力、静电力等作用,以及不同成像模式(如接触模式、非接触模式、点击模式)的应用。读者将学习如何利用AFM来研究蛋白质、DNA、细胞膜等生物大分子的形貌、粘附力以及动态过程。 共聚焦激光扫描显微镜 (CLSM): CLSM在细胞生物学和组织学研究中扮演着重要角色,它能够实现对活细胞和组织的三维层析成像,并精确控制成像深度。我们将详细阐述CLSM的光学路径、共聚焦原理、样品标记技术(如荧光染料、荧光蛋白),以及如何进行多通道成像以同时观察不同分子。本书将指导读者如何利用CLSM进行细胞内结构的定位、蛋白表达的动态变化以及细胞信号传导的研究。 第三部分:样品制备与数据分析 样品制备的艺术与科学: 无论哪种显微技术,高质量的样品制备都是获取可靠结果的关键。本部分将系统介绍不同显微技术所需的样品制备技术,包括固定、脱水、包埋、切片、染色、包被等。我们将讨论不同样品类型(如细胞、组织、微生物、生物材料)的特异性处理方法,以及如何避免样品制备过程中可能出现的伪影。 图像处理与定量分析: 获得的原始显微图像往往需要经过进一步的处理和分析才能提取有用的生物学信息。我们将介绍常用的图像处理软件和技术,如降噪、对比度增强、背景校正、图像分割等。同时,我们将探讨各种定量分析方法,如细胞计数、形态学分析、荧光强度测量、动力学分析等,帮助读者将图像转化为可量化的数据,从而支持科学结论。 第四部分:前沿技术与未来展望 超高分辨率显微镜技术: 随着科学研究的不断深入,对分辨率的要求也越来越高。我们将介绍STED、PALM/STORM等超高分辨率显微技术,并讨论它们如何在纳米尺度上揭示生物过程。 活体成像技术与时间分辨研究: 实时观察生命活动对于理解动态生物过程至关重要。我们将探讨各种活体成像技术,以及如何结合时间分辨的成像策略来研究细胞信号传导、分子动力学等。 多模态成像的融合: 将不同的成像技术与生物学方法相结合,能够提供更全面、更深入的生物学见解。我们将探讨光学显微镜与电子显微镜、X射线成像等技术的融合应用,以及它们在解决复杂生物学问题中的潜力。 本书旨在为生物学领域的学生、研究人员和技术人员提供一个全面而实用的指南,帮助他们理解和掌握现代显微成像技术,从而有效地解决他们在科研中遇到的各种问题。通过理论与实践的结合,读者将能够自信地运用这些先进工具,解锁生物世界更深层次的秘密。

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读后感

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我必须说,这本书的学术深度绝对值得称道,它绝不是一本泛泛而谈的入门读物,而是在基础之上进行了相当深入的探讨。在谈及冷冻电镜(Cryo-EM)的单颗粒分析部分时,我发现作者深入剖析了对称性处理和相位恢复算法的内在逻辑,这对于那些想要深入理解数据处理流程的进阶读者来说,提供了宝贵的见解。书中对分辨率的评估标准,例如傅里叶壳层分析(FSC)的实际应用,讲解得比我之前阅读过的任何一本教科书都要透彻。更令人惊喜的是,作者似乎对当前领域内的一些前沿挑战保持着敏锐的洞察力,比如如何应对大分子复合体的柔性运动对重建图像的影响。他们提供了一些非常实用的“陷阱规避”策略,这些往往是只有在多年科研实践中才能总结出来的宝贵经验。阅读这些章节时,我需要频繁地停下来,结合我自己的实验数据进行反思,思考如何将这些高级技巧应用到我目前遇到的分辨率瓶颈问题中去。总而言之,它成功地在“科普”与“专业参考书”之间找到了一种微妙而高效的平衡点,使得即便是资深的研究人员也能从中汲取新的养分。

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对于一个刚开始筹建自己实验室的生物医学研究者来说,这本书的实用价值简直是无可估量。它不仅仅是理论的堆砌,更是一本实用的操作手册和故障排除指南。我关注的焦点在于成本效益分析和仪器选型这一部分。作者非常坦诚地讨论了不同类型显微镜在不同预算下的性能权衡,没有偏向任何特定的商业品牌,而是客观地分析了不同探测器和真空系统的优劣。更具体地说,关于维护和日常校准的章节,简直是救命稻草。它详尽地列出了每周、每月需要进行的检查清单,包括如何判断光阑是否对齐,以及如何进行简单的漂移校正。我过去常常因为一个小小的对中问题而浪费掉一整个下午的时间,但通过这本书提供的分步指导,现在我可以独立且自信地处理大部分常规的仪器问题,极大地减少了对核心技术人员的依赖。这种“授人以渔”的编写理念,让这本书的价值远远超出了教科书的范畴,更像是一位驻在你身边的首席技术官。

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这本书的叙事风格带着一种独特的、近乎散文式的优雅,这在技术性著作中是相当少见的。它不像某些教材那样冷冰冰地罗列事实,而是更像一位经验丰富的老教授在指导年轻学者进行一次漫长而充满探索欲的显微镜之旅。例如,在描述透射电镜(TEM)中电子束与样品相互作用的物理过程时,作者并未直接抛出复杂的爱伦费尔德公式,而是先营造了一种氛围,描述了电子束穿透薄膜时所经历的“碰撞与偏转”,这种人性化的叙述方式极大地增强了阅读的流畅性。我尤其欣赏其中穿插的一些历史轶事,关于早期科学家如何克服初代仪器的局限性,那种对未知的敬畏和坚持,让人在学习技术的同时,也感受到了科学精神的力量。这种情感上的连接,使得即便是学习那些相对枯燥的参数优化技巧时,我的注意力也从未分散。这本书的结构安排也体现了这种流畅性,它像河流一样,从宏观的仪器构造自然地流淌到微观的图像解析,中间没有生硬的断裂感,读起来非常过瘾。

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这本书的封面设计相当引人注目,那是一种深沉的、近乎宇宙般的蓝色,配上精妙的、仿佛从微观世界捕获到的图像,立刻就将读者的思绪拉向了电子显微镜那神秘的领域。初次翻开它,我立刻感受到作者在试图构建一个既严谨又易于理解的知识体系。它似乎并未将重点过多地放在那些晦涩难懂的物理学原理上,而是巧妙地将其融入到对生物结构成像的实际应用之中。例如,在介绍扫描电镜(SEM)的成像机制时,作者没有堆砌复杂的公式,而是通过一系列生动的类比,将二次电子和背散射电子的收集过程描绘得淋漓尽致,让人仿佛能亲手操作仪器一般。对于那些刚刚接触这个领域的生物学家来说,这种叙事方式无疑是极大的福音,它极大地降低了入门的心理门槛。我尤其欣赏其中关于样品制备章节的详尽程度,那些关于固定液配比的微小调整如何影响最终细胞器的清晰度,都被细致入微地记录下来,这体现了作者深厚的实践经验,绝非纸上谈兵的理论阐述可以比拟。这本书的排版也极为出色,图文的结合恰到好处,每张流程图和实例图都清晰锐利,即使用放大镜观察,也依然保持了极高的可读性。

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我注意到这本书在跨学科的整合方面做出了卓越的贡献,这对于当代生物学研究的趋势来说至关重要。它并没有将自己局限在传统的生物学视角,而是大量引入了材料科学和成像信息学的概念。例如,在图像降噪处理的章节中,作者超越了标准的平均滤波,详细介绍了基于小波变换和深度学习的去噪方法,并清晰地解释了为什么这些方法在处理具有周期性噪声的冷冻电镜图像时更为有效。更值得称赞的是,书中对活细胞成像(In Vivo EM)的讨论,虽然这是一个极具挑战性的领域,但作者依然提供了关于低温生物学和快速冷冻技术(如HPLM)的概览,展示了如何最大限度地保留动态过程的真实性。这种将前沿物理方法与生物问题紧密结合的尝试,极大地拓宽了我的研究思路。读完这本书,我感觉自己不再只是一个单纯的生物学家,而是一个能够熟练运用复杂物理工具来探索生命奥秘的“交叉学科工程师”。它的视野之广、融合之深,确实令人印象深刻。

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