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出版者:Humana Press

作者:Li, Shulin (EDT)

出品人:

页数:524

译者:

出版时间:2008-02-01

价格:USD 99.00

装帧:Hardcover

isbn号码:9781588298775

丛书系列:

图书标签:

• Electroporation
• Cell Biology
• Molecular Biology
• Biophysics
• Laboratory Protocols
• Cell Transformation
• Gene Delivery
• Membrane Permeabilization
• Biotechnology
• Methods in Molecular Biology

Electroporation Protocols 聚焦生命科学研究中的电穿孔技术：原理、方法与应用 《Electroporation Protocols》并非一本涵盖所有生物学知识或技术细节的百科全书，而是一本专注于生命科学研究领域中一种关键实验技术——电穿孔（Electroporation）——的实用指南。本书旨在为研究人员提供一套全面、清晰、可操作的实验方案，帮助他们高效、准确地在各种细胞模型和生物体系中实现目标分子的转导。 核心内容与价值： 本书的出发点是解决生命科学研究中普遍存在的实验难题：如何有效地将外源性核酸（如DNA、RNA）、蛋白质、小分子药物或染料引入细胞内部，以进行基因功能研究、细胞器成像、药物筛选、细胞治疗等多种应用。电穿孔技术以其相对温和、高效、可推广性强的特点，在众多转导方法中脱颖而出，而《Electroporation Protocols》正是为了充分挖掘并优化这一技术的潜力而编写。 书中精心设计的实验方案，涵盖了从基础理论到实际操作的每一个环节，确保了研究人员在实验过程中能够遵循严谨的步骤，避免潜在的错误，并获得可靠的结果。本书的价值体现在以下几个方面： 1. 原理深入浅出： 虽然本书的重点在于“Protocols”（实验方案），但它也清晰地阐述了电穿孔的基本原理。这包括电穿孔过程中细胞膜电位变化、瞬时孔道形成、分子扩散以及影响转导效率的关键因素（如电压、脉冲宽度、脉冲次数、培养基成分、细胞密度等）。理解这些原理有助于研究人员根据自己的实验体系和研究目标，对现有方案进行优化调整，而不是盲目套用。 2. 实验方案多样化与精细化： 本书提供了适用于多种细胞类型和生物系统的电穿孔方案。无论是常用的哺乳动物细胞系（如HeLa, HEK293, Jurkat），还是更具挑战性的原代细胞、干细胞、细菌、酵母、植物原生质体，抑或是体外胚胎模型，本书都提供了相应的、经过验证的实验步骤。每个方案都详尽描述了： 样本准备： 如何获得和处理高质量的细胞悬液，包括细胞密度、活力、清洗和收集等关键步骤。 缓冲液与电极杯选择： 不同体系适用的电穿孔缓冲液配方（如PBS, HEPES-buffered saline, sucrose-based buffers）及其选择依据，以及不同尺寸和类型的电极杯（如2mm, 4mm）的使用指导。 电穿孔参数优化： 详细指导如何根据具体实验目的和细胞类型，系统地优化电压、脉冲宽度、脉冲次数和波形（如指数衰减脉冲、方波脉冲）。例如，可能提供一个初步的参数范围，并建议如何通过小范围测试来确定最佳条件。 转导分子处理： 如何准备和处理需要转导的DNA、RNA、siRNA、shRNA、蛋白质溶液，包括浓度、加入方式和注意事项。 转导后处理： 转导后细胞的恢复、培养、转导效率的检测（如荧光标记、报告基因活性、Western Blotting、qPCR等）以及后续实验的建议。 3. 常见问题与故障排除： 任何实验都可能遇到意想不到的问题，本书预见了研究人员可能遇到的困难，并提供了针对性的解决方案。例如，低转导效率、细胞死亡率高、非特异性染色、信号背景干扰等。书中会分析这些问题的可能原因，并提供相应的排除和优化建议，极大地节省了研究人员的试错时间。 4. 仪器设备指南（侧重应用）： 虽然本书不直接销售仪器，但它会提及和推荐常用的电穿孔仪（Electroporator）类型和配套的电极杯。它会侧重于介绍如何正确使用这些设备，包括电极杯的清洁与维护、仪器的基本操作流程、参数设置界面的理解等，确保研究人员能够安全有效地操作仪器。 5. 应用领域拓展： 本书的实验方案并不仅限于基础的基因过表达或沉默。它还会涉及一些更高级的应用，例如： 基因编辑（CRISPR/Cas9）： 如何高效地将CRISPR/Cas9相关的核酸分子（sgRNA, Cas9 mRNA/plasmid）导入细胞，以实现基因敲除、敲入或点突变。 细胞治疗： 在CAR-T细胞、干细胞治疗等领域，电穿孔技术如何用于细胞的基因修饰和药物递送。 药物递送： 利用电穿孔技术将小分子药物或蛋白药物导入特定细胞，用于药物筛选或疾病治疗模型的研究。 体外诊断： 在某些体外诊断方法的构建中，电穿孔可能作为一种细胞处理手段。 目标读者： 本书的目标读者广泛，包括但不限于： 分子生物学、细胞生物学、生物化学、遗传学、免疫学、肿瘤学、神经科学、发育生物学等领域的博士后研究人员、研究生和技术员。 从事生物技术、制药、基因治疗、细胞治疗等产业的研究人员。 对电穿孔技术感兴趣，需要将其应用于新课题或新体系的生命科学研究者。 总而言之，《Electroporation Protocols》是一本专注于解决生命科学研究者在进行细胞转导时所面临的实际操作性挑战的书籍。它通过提供详细、可重复、且经过验证的实验方案，以及对原理和常见问题的深入分析，帮助研究人员高效、自信地掌握电穿孔这项关键技术，从而加速他们的科学发现和研究进程。本书的价值在于其高度的实用性和指导性，是每个在生命科学领域需要进行细胞转导实验的研究人员案头必备的参考资料。

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