绝大部分省市的初赛和复赛范围以中学（主要是高中）所学内容为主，并适当参考《中学生物竞赛大纲》的考试范围。试题难度一般控制在高考或略高于高考，命题方式主要包括单选题、多选题、连线题、简答题。在考查基础知识的同时，着重考查理解、分析、综合、应用能力，题目一般比较灵活。
全国联赛的理论试题以高中生物学为基础，并有一定扩展，扩展的部分可参考高校《普通生物学》的内容。试题难度大于高考、易于全国竞赛试题。具体范围是：细胞生物学、生物化学、微生物学共25%；植物解剖和生物15（%重点是种子植物组织和器官的结构和功能）；动物解剖和生理15%（重点是组织和器官的结构和功能）；动物行为学5%；遗传学与进化15%；生态学15%；生物系统学10%（重点是结构和功能、主要类群中典型生物之间的演化和生态的关系）。
全国联赛和全国竞赛的试题来源是，每年各省分会选送30-50题（限选择题和是非题），供全国竞赛委员会选用，最后在全国竞赛委员会的领导下，由命题小组选定全国生物联赛、全国生物竞赛试题。
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