病理学实验指导 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:第二军医大

作者:丁运良

出品人:

页数:109

译者:

出版时间:2007-9

价格:18.00元

装帧:

isbn号码:9787810607896

丛书系列:

图书标签:

• 病理学
• 实验
• 医学
• 诊断
• 教学
• 指南
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• 医学检验

现代分子生物学技术及其应用 本书概述 《现代分子生物学技术及其应用》旨在为生命科学领域的研究人员、高年级本科生和研究生提供一个全面、深入且实用的分子生物学技术平台。本书不仅详细阐述了经典分子生物学实验方法的原理、操作步骤和数据分析，更着重介绍了近年来快速发展和广泛应用的前沿技术，如高通量测序、单细胞分析、CRISPR基因编辑系统及其在基础研究和转化医学中的最新进展。 本书结构清晰，内容涵盖分子生物学研究的各个关键环节，从基础的核酸和蛋白质的提取纯化，到复杂的基因功能探究和分子调控网络解析。我们力求在理论深度和实验可操作性之间找到最佳平衡点，确保读者能够高效地将所学知识转化为实际的科研能力。 --- 第一部分：分子生物学实验基础与准备 第一章：实验室安全、规范与质量控制 本章首先强调分子生物学实验室的生物安全等级（BSL）要求、化学品安全管理和废弃物处理规范。随后，深入探讨实验质量控制的重要性，包括试剂的配制、灭菌方法（高压蒸汽灭菌、过滤除菌、紫外照射）的适用性判断，以及常用缓冲液体系的优化方案（如Tris-EDC-DNA酶抑制缓冲液、RIPA裂解液的配方和用途）。重点讨论了如何建立和维护实验记录的标准化流程，确保实验结果的可重复性和可追溯性。 第二章：核酸的提取、纯化与定量 本章详细对比了从不同来源（血液、组织、植物、细菌、FFPE样本）提取总DNA、基因组DNA、质粒DNA和总RNA的各种方法。 溶液法（酚氯仿抽提）： 深入剖析其分离原理，以及优化pH值和盐浓度以提高回收率和纯度的策略。 固相萃取法（硅胶柱层析）： 详细阐述硅胶膜的吸附机制，并对比不同商业试剂盒在处理不同样本量和纯度要求下的优缺点。 自动化核酸提取： 介绍了基于磁珠分离技术的自动化平台，及其在高通量样本处理中的优势。 定量与质量评估： 重点讲解了如何使用分光光度计（NanoDrop）和荧光定量仪（Qubit）进行核酸的准确定量，以及使用琼脂糖凝胶电泳和生物分析仪（如Agilent Bioanalyzer）评估核酸的完整性和纯度（A260/A280、A260/A230比值）。 第三章：凝胶电泳与分子分离技术 本章系统介绍了琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的原理和应用。 琼脂糖凝胶电泳： 详细说明了凝胶浓度选择对分离不同分子量DNA片段的影响，以及溴化乙啶（或替代染料如GelRed）的安全使用与成像技术。 非变性与变性PAGE： 区分了非变性凝胶在研究蛋白质复合物活性时的应用，以及变性PAGE在分离核酸、确定分子量方面的精确性。 脉冲场凝胶电泳（PFGE）： 简要介绍PFGE在分离大型染色体DNA片段中的应用背景。 --- 第二部分：核心分子生物学技术精讲 第四章：聚合酶链式反应（PCR）技术及其变体 PCR是分子生物学的基石，本章对其原理进行了全面梳理，并着重于实用性。 标准PCR与热启动PCR： 分析了影响PCR效率的关键因素（引物设计、退火温度优化、酶的选择）。 定量实时荧光PCR（qPCR/RT-qPCR）： 详细介绍了SYBR Green法和TaqMan探针法的反应动力学、标准曲线的建立与分析，以及绝对定量和相对定量（ΔΔCt法）的计算流程。 高级PCR技术： 涵盖了反转录PCR（RT-PCR）、高保真PCR（High-Fidelity PCR）、巢式PCR（Nested PCR）的应用场景和技术难点。 第五章：核酸杂交技术（Southern, Northern, In Situ） 本章探讨了基于碱基互补配对原理的分子检测技术。 Southern Blotting： 详述了DNA片段的酶切、转移、探针标记（放射性与非放射性标记）、杂交条件（温度、时间）的优化，以及在基因克隆和DNA指纹分析中的应用。 Northern Blotting： 侧重于RNA的稳定性和探针的选择（寡核苷酸探针与cDNA探针），用于分析基因的转录水平和选择性剪接。 原位分子杂交（ISH/FISH）： 介绍了使用荧光标记的探针直接在组织切片或细胞内定位特定核酸序列的方法，及其在疾病诊断中的地位。 第六章：基因克隆与重组DNA技术 本章聚焦于构建和筛选重组DNA载体的完整流程。 限制性内切酶与连接酶： 讨论了粘性末端和平末端的生成，连接反应的优化，以及T4 DNA连接酶的活性影响因素。 载体选择与构建： 对比了质粒载体、噬菌体载体、人工染色体（BAC/YAC）的特性，以及启动子、筛选标记的选择。 转化与筛选： 详细描述了高效大肠杆菌转化（热激法和电穿孔法），以及抗生素筛选和蓝白斑筛选的原理。 --- 第三部分：蛋白质组学与相互作用分析 第七章：蛋白质的提取、分离与鉴定 本章处理分子生物学研究中的蛋白质组部分。 细胞裂解与蛋白质组分分离： 比较了温和裂解（用于活性蛋白）和强力裂解（用于核蛋白、膜蛋白）的缓冲液体系（如NP-40, Triton X-100, Urea, 硫脲）。 SDS-PAGE与二维电泳（2D-PAGE）： 深入讲解了蛋白质变性分离的机制，并介绍了2D-PAGE在高分辨率蛋白质分离中的关键技术点。 蛋白质印迹法（Western Blotting）： 详细描述了从转膜到抗体孵育的每一步骤，包括一抗/二抗的选择、封闭剂的优化，以及化学发光和荧光检测体系的比较。 第八章：蛋白质相互作用研究技术 本章涵盖了确定生物大分子间相互作用的关键方法。 酵母双杂交（Y2H）： 阐述了其筛选互作蛋白的原理，以及如何设计捕获载体和表达载体。 免疫共沉淀（Co-IP）与串联亲和纯化（TAP）： 重点讨论了抗体选择对Co-IP结果的影响，以及如何通过Western Blot验证目标蛋白是否成功共沉淀。 生物物理学方法简介： 简要介绍表面等离子共振（SPR）和表面激元共振成像（SPRi）在定量分析蛋白质结合亲和力（Kd值）中的应用。 --- 第四部分：基因功能研究与前沿技术 第九章：基因沉默技术：siRNA与shRNA 本章聚焦于通过RNA干扰（RNAi）技术研究基因功能缺失的表型。 设计与递送： 讨论了siRNA/shRNA靶向序列的选择原则，以及如何设计对照序列。重点对比了转染试剂（脂质体、聚乙烯亚胺PEI）和病毒载体（慢病毒、腺病毒）在体外和体内的递送效率。 效率评估： 介绍如何通过qPCR或Western Blot验证靶基因的敲低效率。 第十章：基因编辑技术：CRISPR/Cas9系统精要 本章详细介绍了革命性的基因编辑工具及其在生命科学中的应用。 CRISPR/Cas9系统： 阐述了gRNA的设计、Cas9核酸酶的作用机制，以及如何构建单表达载体或体外转录系统。 编辑效率优化与脱靶检测： 探讨了通过优化细胞状态、使用特异性修饰的Cas9蛋白（如eCas9, HF-Cas9）来提高编辑特异性的策略。 高通量筛选与体内应用： 介绍了如何利用CRISPR文库进行功能筛选，以及基因编辑技术在遗传性疾病模型构建中的前景。 第十一章：高通量测序技术（NGS）原理与数据解读 本章面向数据的获取与解析，是现代生命科学研究的必备技能。 NGS技术概述： 对比了第一代（Sanger）和第二代（Illumina/Solexa）测序平台的原理差异。 主要应用流程： 详细讲解了转录组测序（RNA-Seq）、全基因组重测序（WGS）、ChIP测序（ChIP-Seq）和ATAC-Seq的文库制备流程。 基础生物信息学分析入门： 简要介绍原始数据（FASTQ文件）的质量控制、序列比对（Alignment）软件（如HISAT2, BWA）的选择，以及差异表达基因（DEG）的统计学分析方法。 --- 附录 常用分子生物学计算公式（摩尔浓度、稀释倍数、PCR产物量计算） 常用酶活性单位定义与储存条件 常用限制性内切酶识别序列与切割位点表

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这本书的装帧设计着实让人眼前一亮，封面的深沉色调与内页的清晰排版形成了一种微妙的对比，初次翻阅时，那种厚重而又严谨的质感便扑面而来，让人立刻意识到这不是一本轻松的读物。我特别欣赏那种对于细节的关注，比如扉页上字体大小的微调，以及章节分隔页所使用的那种略带粗粝感的纸张，这些看似微不足道的元素，却共同营造出一种对知识的敬畏感。在实际阅读过程中，书中的插图和图表布局安排得极其考究，线条的粗细、色彩的选取都恰到好处地起到了辅助理解的作用，而不是喧宾夺主。我记得有一次，我需要快速定位某个特定病理切片的描述，结果发现索引系统异常精准，定位过程几乎是无缝衔接的。这种对阅读体验的整体性考量，远超出了我预期的教科书范畴，更像是一件精心打磨的工艺品，让人在学习的疲惫中也能找到一丝视觉上的慰藉。 这种对美学的追求，无疑提升了学习过程中的愉悦度和专注度，使得原本枯燥的理论学习变得更加引人入胜。

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我个人认为，这本书在实用性方面做得相当出色，尤其对于动手能力的要求，体现出一种“学以致用”的务实态度。它没有将实验操作变成一套孤立的步骤指南，而是将每一个实验环节都置于具体的病理诊断背景之下进行解释。比如，在介绍某项染色技术的章节，作者不仅详细描述了试剂的配比和操作流程，更重要的是，解释了该技术所依据的生物化学原理以及它在特定病变鉴别诊断中的独特价值。这种理论与实践紧密结合的叙述方式，极大地增强了学习的代入感。我记得我尝试按照书中的指导进行一次模拟实验设计时，发现它提供的对照组和阳性/阴性参考标准异常清晰，有效避免了初学者常犯的流程性错误。这种对实验设计思路的引导，远比单纯的“跟着做”要宝贵得多，它培养的是一种批判性的实验思维，让人学会思考“为什么”要这么做，而不是仅仅记住“怎么”做。

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这本书的价值不仅仅体现在其内容本身，更在于它所建立起来的学术参照体系。它似乎不仅仅是一本教材，更像是一个学科知识领域的“地图集”。在很多章节的末尾，它会列出推荐的进一步阅读文献和经典专著，这种导向性设置体现了对读者学术生涯的深远考虑。我发现，通过追溯这些参考资料，我得以进入到更深层次的学术探讨中去，这本书充当了一个高效的“索引器”和“发射台”。此外，书中对于历史脉络的梳理也相当到位，偶尔会穿插一些著名病理学家及其发现的小故事或里程碑事件，这让冰冷的科学知识瞬间变得有人情味和历史厚重感。这使得学习过程不再是对孤立事实的记忆，而是一段参与到人类认识疾病进程的旅程。这种对知识传承与发展的重视，无疑提升了这本书的收藏价值和作为工具书的生命力。

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这本书在内容的深度和广度上展现出了令人信服的专业性，尤其是在某些疑难病症的解析部分，作者显然投入了大量的精力进行文献梳理和临床经验的提炼。我发现它不仅仅是简单地罗列知识点，而是巧妙地构建了一个层层递进的逻辑框架，引导读者从宏观的病理生理过程，逐步深入到微观的细胞和分子机制。举个例子，书中对于炎症反应的描述，不像其他教材那样只停留在表面，而是详细剖析了不同介质在不同阶段的动态平衡与失调，这种精细入微的分析，极大地拓宽了我对病理过程复杂性的认识。我甚至发现，它对于一些前沿的研究热点也有所涉猎，这表明编纂团队紧跟学科发展脉搏，没有满足于既有的知识体系。阅读过程中，我经常需要停下来，不是因为不理解，而是因为被其阐述的深度所震撼，不得不反复咀嚼其中的精髓。对于任何一位希望在病理学领域深耕的人来说，这本书无疑提供了一个坚实且富有挑战性的知识平台。

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阅读体验方面，这本书的语言风格呈现出一种独特的、近乎于散文诗般的严谨性，这在我阅读的众多学术著作中是相当罕见的。作者在保持高度准确性的前提下，避免了那种机械、冷硬的术语堆砌，使得长段落的阅读也保持了流畅性。句子结构的变化非常丰富，时而长句严密论证，时而短句精辟总结，这种节奏的把控让人在长时间阅读后依然能保持较高的信息接收效率。我特别喜欢它在描述一些罕见病例或复杂现象时所采用的类比手法，这些类比既贴切又富有启发性，仿佛有一位经验丰富的导师在你身边，用最精炼的语言为你剖析难点。这种优雅的表达，无疑降低了专业知识的理解门槛，让那些初次接触该领域的学习者不会因语言的晦涩而望而却步。它证明了学术写作也可以兼具深度、准确性与可读性，而不是只能在枯燥中徘徊。

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