Analytical Biochemistry (3rd Edition) (Analytical Biochemistry) pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:Prentice Hall

作者:David Holme

出品人:

页数:504

译者:

出版时间:1998-01-10

价格:USD 133.00

装帧:Paperback

isbn号码:9780582294387

丛书系列:

图书标签:

• Biochemistry
• Analytical Chemistry
• Biotechnology
• Molecular Biology
• Life Sciences
• Chemistry
• Research
• Laboratory Techniques
• Enzymology
• Proteomics

深入分子层面的生命科学研究指南 书名： Advanced Techniques in Molecular Biology and Proteomics 作者： Dr. Evelyn Reed & Professor Marcus Chen --- 内容概述 本书旨在为生命科学领域的研究人员、高级本科生和研究生提供一套全面且深入的实验技术与分析策略。本书聚焦于当前生物化学、分子生物学和蛋白质组学前沿领域中最为关键和复杂的实验方法，旨在弥合理论知识与高难度实验操作之间的鸿沟。不同于基础操作手册，本书更侧重于实验设计的严谨性、结果的深度解析，以及如何利用尖端技术解决复杂的生物学难题。 全书结构清晰，分为五大部分，涵盖了从核酸分析到蛋白质功能解析的完整流程，并特别强调了数据处理和质量控制的重要性。 --- 第一部分：高精度核酸分析与基因组学前沿 (High-Fidelity Nucleic Acid Analysis and Genomics Frontiers) 本部分深入探讨了现代分子生物学中用于基因组、转录组和表观遗传学研究的核心技术。 第一章：新一代测序（NGS）的原理与深度优化 详细介绍了Illumina、PacBio和Oxford Nanopore等主流测序平台的化学基础、文库构建的优化策略，以及如何针对特定应用（如ChIP-seq, RNA-seq, Single-cell sequencing）调整实验参数。重点讨论了如何通过优化DNA/RNA提取纯化步骤，最大限度地减少文库构建的偏倚（Bias）。 第二章：精准基因编辑与体内/外验证（In Vivo/Ex Vivo Validation） 本书不再停留在CRISPR-Cas9的基础介绍，而是深入剖析了Prime Editing、Base Editing等新型核酸编辑工具的分子机制和适用性。详细阐述了如何设计高特异性的sgRNA，如何利用冷冻电镜（Cryo-EM）数据指导Cas9的靶向选择，以及在不同物种（哺乳动物、植物、微生物）中实现高效稳定的基因敲入/敲除的挑战与解决方案。章节末尾提供了详细的脱靶效应评估流程，包括 GUIDE-seq 和 CIRCLE-seq 等方法的实践指南。 第三章：表观遗传学动态研究：甲基化与染色质重塑 阐述了全基因组亚硫酸氢盐测序（WGBS）与靶向甲基化分析（如RRBS）的技术差异和数据解读。重点介绍了ATAC-seq（Assay for Transposase-Accessible Chromatin using sequencing）的优化，以在低起始细胞数下获得高信噪比的染色质开放区域图谱。同时，探讨了组蛋白修饰的共定位分析技术，包括双重免疫沉淀和基于质谱的修饰位点定位。 --- 第二部分：蛋白质组学：从分离到定量（Proteomics: From Separation to Quantification） 本部分专注于蛋白质的结构解析、定量分析以及蛋白质相互作用网络的研究，是理解细胞功能的核心。 第四章：高分辨率蛋白质分离技术与二维电泳的复兴 本书详细回顾了传统的蛋白质分离技术，如等电聚焦（Isoelectric Focusing）和不同梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的精细操作。重点介绍了高效液相色谱（HPLC）和超高效液相色谱（UHPLC）在蛋白质和肽段分离中的应用，特别是在制备级纯化中的参数选择。 第五章：串联质谱（MS/MS）的定量策略与数据处理 深入讲解了 SILAC (Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture)、TMT (Tandem Mass Tagging) 和 iTRAQ 等标记技术在绝对和相对定量中的优劣势。详细指导读者如何校准质谱仪、优化碰撞能量（Collision Energy）和碎片模式，以提高肽段的识别率和定量的准确性。对MaxQuant, Proteome Discoverer等主流数据处理软件的参数设置进行了详尽的案例分析。 第六章：蛋白质相互作用组学：稳定捕获与验证 专注于如何稳定和高效地进行蛋白质免疫沉淀（IP）和 Co-IP。强调了在缓冲液设计中，离子强度、去污剂选择（如CHAPS vs Triton X-100）对弱相互作用捕获的关键作用。介绍了基于生物素化的亲和纯化技术（Affinity Purification-Mass Spectrometry, AP-MS）的优化，以及如何区分真阳性和非特异性背景结合的策略。 --- 第三部分：结构生物学与高级成像技术（Structural Biology and Advanced Imaging） 本部分涵盖了解析生物大分子三维结构和细胞内动态过程的尖端方法。 第七章：冷冻电子显微镜（Cryo-EM）数据采集与重建流程 本书将Cryo-EM视为解决复杂蛋白质复合物结构问题的核心工具。详细介绍了样品制备的“金标准”——玻璃碳膜和多孔碳膜的选择，以及高速冷冻和加权技术。随后，系统阐述了图像处理流程，包括2D分类、初次3D重建、CTF校正、均一化以及高分辨率局部拟合的技巧。 第八章：荧光共振能量转移（FRET）与单分子追踪 FRET在监测分子间距离和构象变化中的应用被详尽阐述。重点在于如何选择合适的荧光染料对（如Alexa Fluor系列或定制的caged compounds），以及如何校正“能量转移效率漂移”。此外，本书还介绍了单颗粒追踪（SPT）技术，用于分析细胞膜受体或细胞骨架蛋白的动态运动模式及其扩散系数的计算。 --- 第四部分：酶学与生物化学功能分析的精细化 (Refined Enzymology and Biochemical Function Analysis) 本部分聚焦于酶活力的精确测定、动力学分析及底物特异性的探究。 第九章：酶动力学的高级分析与模型拟合 超越经典的Michaelis-Menten模型，本书深入探讨了协同效应（Cooperativity）、变构调控以及多底物酶反应的动力学解析。提供了使用OriginPro或GraphPad Prism进行复杂动力学数据拟合的步骤指南，并强调了在有限数据点下进行稳健性分析的重要性。 第十章：活性氧物种（ROS）与氧化还原生物学的定量测量 详细描述了如何利用荧光探针（如DCFH-DA, DHE）对细胞内瞬时和稳态的ROS水平进行准确量化。书中特别指出了探针扩散、淬灭效应以及细胞内定位对测定结果的干扰，并提出了针对性的校正方法，以区分细胞质、线粒体和内质网中的氧化应激水平。 --- 第五部分：数据整合与生物信息学整合 (Data Integration and Bioinformatics Pipeline Management) 第十一章：多组学数据集成与网络构建 本章旨在指导研究人员将基因组学、转录组学和蛋白质组学数据整合起来，构建功能性生物网络。介绍了基于网络推断的因果关系分析方法，如基于贝叶斯网络的推断模型。强调了数据标准化（Normalization）和批次效应（Batch Effect）消除在多组学分析中的决定性作用。 第十二章：实验设计的严谨性与统计学检验的正确应用 本部分是全书的基石。它以批判性的眼光审视了实验重复（Biological Replicates vs. Technical Replicates）的选择、样本量的估算（Power Analysis），以及如何选择最适合非参数数据的统计检验方法（如Mann-Whitney U test, Kruskal-Wallis test），以确保研究结论的科学可信度和可重复性。本书强调，最复杂的实验也必须建立在严谨的统计学基础之上。 --- 目标读者：致力于利用前沿技术探索生命奥秘的博士后研究员、高级实验室技术人员、以及正在攻读分子生物学、生物化学、生物工程等领域高级学位的学生。本书要求读者已具备扎实的分子生物学基础知识。

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