目錄
第一章 肝炎病毒的分子生物學概論
第一節 分子生物學的理論和技術是肝炎病毒研究的重要手段
一、丙肝病毒和戊肝病毒的發現從基因水平上取得突破
二、分子生物學技術是肝炎病毒病原學檢測的重要手段
三、HBVDNA轉染細胞係的建立為HBV的研究提供瞭體外繁殖體係
第二節 分子生物學技術是病毒性肝炎發病機製的研究手段
一、分子雜交技術原位檢測肝炎病毒的核酸成分
二、HBVDNA原位錶達與HBcAg錶達方式及其與病理改變的關係
三、轉基因動物是研究HBV等肝炎病毒緻病機製的閤適的模型
第三節 肝炎病毒的分子生物學研究可豐富分子生物學的理論
一、HBVDNA復製是研究逆轉錄過程的一個很好的模型
二、HBVDNA復製過程是研究轉錄物剪切加工機製的模型
三、HBVDNA的研究也是基因錶達調控的一個重要手段
第四節 用分子生物學技術探索抗肝炎病毒治療的新途徑
一、分泌抗病毒物質的抗肝炎病毒基因治療
二、利用肝炎病毒的反式調節機製探討抗肝炎病毒治療的新方法
三、反義技術抗肝炎病毒治療方法
第五節 肝炎病毒分子生物學內容
一、肝炎病毒的基因結構和功能
二、肝炎病毒基因錶達和調控
三、抗肝炎病毒新方法的探討
第二章 甲型肝炎病毒的分子生物學
第一節 HAV基因結構
一、5′非翻譯區
二、編碼區
三、3′非翻譯區
第二節 HAV基因組編碼産物
一、P1區
二、P2區
三、P3區
第三節 HAV的復製
一、HAV體外增殖
二、HAV在體內的生活周期
第四節 HAV變異及分型
一、HAV基因組核酸變異
二、HAV氨基酸序列變異
三、HAV分型
第五節 HAV抗原結構
第六節 HAV減毒與細胞培養適應化的分子基礎
一、HAV野毒株與減毒株核苷酸比較
二、2B和2C區基因突變
三、5′－NTR對HAV體外生長的影響
第七節 HAV疫苗的研究進展
一、HAV滅活疫苗
二、HAV減毒活疫苗
三、基因工程疫苗
第三章 乙肝病毒基因的結構與功能
第一節 HBV基因組
一、順嚮重復序列
二、S基因區
三、C基因區
四、P基因區
五、X基因區
第二節 HBV的復製
一、HBV進入肝細胞
二、HBV細胞內移行
三、超螺鏇雙鏈HBVDNA的形成
四、HBVDNA前基因組的閤成與裝配
五、HBVDNA雙鏈的形成
六、HBV顆粒的裝配與釋放
第三節 HBVDNA的轉錄
第四節 HBV結構蛋白
一、包膜蛋白
二、核心區蛋白
三、HBVDNA多聚酶蛋白
四、HBV的X蛋白
第四章 丙肝病毒的分子生物學
第一節 HCV基因的剋隆化
一、HCV是一種RNA病毒
二、5－1－1片段的剋隆
三、HCV基因組剋隆化的意義
第二節 丙肝病毒的基因結構
一、丙肝病毒基因的一級結構
二、中國河北株與美、日株一級結構的比較
三、中國丙型肝炎病毒河北流行株和上海流行株核苷酸序列的比較
四、中國丙型肝炎病毒基因組剋隆的方法
第三節 HCV基因組變異及分型
一、HCV基因組分型的基礎
二、HCV基因組分型的方法
三、HCV基因組分型的意義
第四節 丙肝病毒蛋白的翻譯
一、HCV蛋白編碼的基因結構
二、核糖體與HCV5′－NTR結閤的方式
三、HCV病毒蛋白的裂解産物
四、HCV病毒多蛋白的裂解酶NS3
第五節 丙肝病毒感染的分子診斷
一、HCV基因組擴增技術
二、重組HCV抗原
三、人工閤成HCV抗原
四、第一代抗－HCV檢測方法
五、第二代抗－HCV檢測方法
六、抗－HCVIgM的檢測
七、HCV核酸和蛋白的原位錶達
第五章 丁型肝炎病毒的分子生物學
第一節 HDV的結構特性
第二節 HDV的基因組和抗基因組
一、HDV基因組的一級結構的發現
二、HDV抗基因組RNA
第三節 HDV的復製
一、研究HDV基因組復製的實驗係統
二、HDVRNA復製的代謝需要
三、亞基因組mRNA
四、翻譯
五、嗜肝DNA病毒在HDV基因組復製中的作用
六、HDAg在HDV復製中的作用
七、自身裂解
八、自連
九、HDV（復製）對HBV的影響
第四節 HDV的蛋白質
一、HDAg的一般特性
二、兩種蛋白的結構區及意義
三、HDAg′的發現及特性
四、28kDa的發現
第五節 HDV的分子生物學內容在診斷、治療及預防等中的應用
一、診斷上的應用
二、治療上的應用
三、預防上的應用
四、其它的應用
第六章 戊型肝炎病毒的分子生物學
第一節 HEV基因片段的剋隆化
一、原始材料
二、HEVcDNA剋隆化實驗流程
三、HEVcDNA剋隆的結果
四、HEVcDNAET1.1成功的意義
第二節 HEV基因組的結構
一、HEV核苷酸的一級結構
二、HEVcDNA全序列剋隆策略
三、不同株的一級序列比較
四、戊肝病毒基因組與其它肝炎病毒基因組的比較
五、HEVRNA的二級結構
第三節 HEV基因組錶達研究
一、HEVRNA開放讀框分析
二、翻譯方式
三、HEV抗原的錶位
第四節 HEV基因重組錶達與突變
一、HEV蛋白在剋隆載體中的錶達
二、HEV病毒蛋白融閤基因的錶達
三、HEV基因組的變異與突變
第五節 HEV的生活周期與體外培養
一、HEV的生活周期
二、HEV的細胞培養
第六節 HEV的分子免疫學
一、HEV病毒抗原
二、HEV病毒蛋白的抗原決定簇
三、HEV抗原在肝髒中的錶達
四、HEV錶達人B細胞抗原錶位
第七章 庚型肝炎病毒和GB病毒的分子生物學
一、概況
二、GBVs和HGV的基因構成及相應特性
三、GBVs和HGV的結構蛋白
第八章 乙肝病毒DNA轉染細胞係的建立和應用
第一節 HBVDNA轉染細胞係的建立
一、HBVDNA目的基因
二、靶細胞的選擇
三、基因轉移方法
第二節 HBVDNA轉染細胞係復製和錶達的特點
一、HBVDNA轉染細胞係中HBVDNA的存在狀態
二、HBVDNA轉染細胞係中HBVDNA復製特點
三、HBVDNA轉染細胞中的轉錄産物
四、HBV蛋白的錶達
五、轉染細胞中HBVDNA錶達調控
六、HBV顆粒的裝配
第三節 乙肝病毒基因組轉染細胞係的應用
一、HBV結構基因的錶達
二、HBVDNA調控研究
三、HBVDNA突變研究
四、HBV緻病機製研究
五、HBV感染與肝細胞癌的關係
六、HBVDNA的轉染在HDV研究中的應用
第四節 轉染細胞係在抗HBV藥物研究中的應用
一、病毒基因組復製
二、病毒的轉錄
三、蛋白的錶達
四、藥物結構和抗HBV活性關係
第九章 乙肝病毒的基因突變研究
第一節 人工突變研究方法
一、直接的缺失與插入突變
二、係列缺失突變體構建
三、人工閤成方法
四、PCR擴增法
五、寡核苷酸定點誘變
六、盒式突變
第二節 直接重復序列的突變
一、突變體的構建
二、DR區突變的意義
第三節 SORF基因突變
一、前S1區突變
二、前S2基因突變
三、S基因突變
第四節 CORF區基因突變
一、前C區突變
二、C區突變
第五節 PORF和XORF的突變
一、PORF的突變
二、XORF的突變
第十章 乙肝病毒復製和錶達的調控
第一節 基因調控的研究方法
一、S1核酸酶作用
二、引物延伸實驗
三、基因突變法
四、體外轉錄係統
五、報道基因技術
六、異種啓動子錶達實驗
七、尾隨序列的置換與突變
第二節 HBV基因調節的結構基礎
一、增強子序列
二、HBV基因的啓動子
第三節 HBVDNA復製的調節
一、HBVDNAP突變與HBVDNA復製
二、前基因組RNA轉位與HBVDNA復製
三、HDV基因共轉染對HBV復製的影響
四、影響HBVDNA復製的細胞因子
第四節 HBVDNA轉錄物的剪切與調節
一、HBVDNA轉錄物的種類和功能
二、HBVDNA轉錄物剪切現象的發現
三、HBVDNA轉錄物剪切機製
四、HBVDNA轉錄物的剪切特點
第十一章 乙肝病毒與細胞因子
第一節 影響HBVDNA錶達調控的細胞因子
一、HBV感染的免疫應答
二、細胞因子的應答
三、轉錄調節因子的應答
第二節 乾擾素與乙肝病毒
一、HBV感染導緻IFN係統的改變
二、乾擾素對HBV復製與錶達的影響
三、HBVDNA的復製和錶達對IFN的影響
第三節 白細胞介素－2與乙肝病毒
一、IL2抗病毒作用的發現
二、ILL2的抗乙肝病毒作用
三、IL－2抗HBV作用的機製
四、IL－2轉基因錶達抗病毒基因治療的優勢
第十二章 肝炎病毒與肝細胞癌
第一節 肝炎病毒緻肝細胞癌的證據
一、病因學
二、流行病學
三、動物模型和轉基因動物
四、轉染細胞的模型
五、肝炎病毒與癌基因的激活
第二節 HBVDNA整閤與HCC
一、HBVDNA在肝細胞基因中的整閤
二、HBVDNA整閤與HCC間的相互關係
三、HBVDNA整閤區的細胞基因重排
四、乙型肝炎病毒緻原發性肝癌模式
第三節 HBVDNAX基因與HCC
一、X基因ORF的結構和作用
二、X抗原對癌基因的激活
三、X基因研究的意義
第四節 癌基因與HCC
一、抗癌基因P53與肝細胞癌
二、癌基因與肝細胞癌
第五節 HCV和HCC
一、原發性肝癌的抗－］HCV檢測
第十三章 乙肝病毒蛋白質的基因工程錶達
第一節 HBV蛋白基因工程錶達的條件
一、錶達細胞宿主
二、錶達載體
三、HBVDNA基因片段
第二節 原核細胞錶達係統
第三節 酵母菌錶達係統
一、常用的酵母剋隆載體
二、啓動子的選擇
第四節 哺乳動物細胞錶達係統
一、錶達的策略
二、小蛋白的錶達
三、中蛋白的錶達
四、大蛋白的錶達
第五節 非包膜蛋白的基因工程錶達
一、核心基因的錶達
二、多聚酶的錶達及HBxAg的錶達
第十四章 乙肝病毒轉基因小鼠
第一節 轉基因動物的發展
一、早期的轉基因動物
二、轉基因動物中基因的錶達
三、外源基因的錶達對轉基因動物的影響
第二節 轉基因動物的建立方法
一、外源基因的準備
二、生殖細胞的準備
三、外源基因導入受精卵的方法
四、受體動物的準備及轉導受精卵的植入
五、轉基因動物的鑒定
第三節 轉基因動物的應用
一、腫瘤研究
二、免疫學研究
三、動物品種的改良
四、基因錶達的調節和控製
五、生物工廠
第四節 乙肝病毒轉基因小鼠
一、乙肝病毒概況
二、乙肝病毒轉基因小鼠的建立
三、病毒基因錶達的調控
四、病毒基因組的復製
五、病毒蛋白的閤成
六、轉基因動物中的HBV緻病性
七、重排序列的不穩定性
第十五章 肝炎病毒基因組的PCR擴增
第一節 PCR技術的原理
一、PCR技術的理論根據
二、PCR技術的基本過程
三、PCR技術的影響因素
四、PCR技術的類型
第二節 幾種新型的PCR技術
一、定量PCR技術
二、原位PCR技術
三、SISPAPCR技術
第三節 HCVRNA定量PCR技術
一、標本的倍比稀釋法
二、競爭性逆轉錄PCR技術
三、放射性核素摻入法
四、HCVRNA定量檢測的應用
第四節 PCR技術在乙肝病毒研究中的應用
一、檢測微量HBVDNA
二、抗病毒療效的評價
三、用於HBsAg亞型的研究
四、血液及血製品安全性的研究
五、鑒定HBsAg陰性的HBV感染者
第十六章 抗肝炎病毒的基因治療
第一節 基因治療概述
一、基因治療的策略
二、基因治療的條件
三、基因治療的操作步驟
四、影響基因治療的因素
五、病毒性肝炎基因治療的整體構想
第二節 細胞內免疫抗病毒基因治療
一、細胞因子轉基因錶達
二、抗病毒蛋白的轉基因錶達
三、病毒特異性抗體轉基因錶達
四、反式調節機製抗病毒基因治療
五、反義技術抗病毒基因治療
第三節 細胞自殺機製的抗病毒基因治療
一、細胞自殺機製設計思路
二、病毒主導性酶藥物預施療法
三、白喉毒素的轉基因錶達
四、細胞程序化死亡機製
五、細胞自殺機製設計的應用
第十七章 抗肝炎病毒的反義技術
第一節 反義技術的概念
一、反義技術的定義
二、原核細胞中的反義分子
三、真核細胞中的反義分子
第二節 反義分子的種類和來源
一、反義分子的種類
二、反義分子的來源
第三節 反義技術的原理和應用
一、反義技術的原理
二、反義技術的應用
第四節 反義技術抗肝炎病毒的作用靶位
一、甲肝病毒基因組位點
二、乙肝病毒基因組位點
三、丙肝病毒基因組位點
四、丁肝病毒基因組位點
五、戊型肝炎病毒基因組位點
第十八章 抗肝炎病毒的寡核苷酸
第一節 寡聚核苷酸的種類
一、n－ODN
二、修飾的ODN
三、ODN與其它反應基團的結閤
第二節 反義寡核苷酸的作用機製
一、反義寡核苷酸的作用靶分子
二、反義寡核苷酸的作用類型
第三節 反義寡核苷酸的藥代動力學
一、一般原理
二、定量分析方法
三、體外資料
四、體內資料
五、藥物毒性
第四節 寡核苷酸的閤成
一、反義寡核苷酸人工閤成的發展
二、核昔酸閤成的策略
三、核酸小片段的化學閤成
四、核酸小片段的酶促閤成法
第十九章 抗肝炎病毒的核酶技術
第一節 核酶概述
一、核酶的發現
二、核酶的基本結構
三、核酶裂解反應條件
四、核酶催化的酶學性質
五、核酶RNA的來源
第二節 核酶的分子設計
一、靶鏈的選擇
二、裂解位點
三、側翼序列
四、活性中心化學修飾
五、載體序列
六、啓動子序列
七、順式和反式核酶
八、二級結構
第三節 抗肝炎病毒的應用
一、抗HAVRNA核酶技術
二、抗HBV核酶技術
三、抗HDV核酶技術
索引
· · · · · · (
收起)
