具体描述
《实验动物配子与胚胎实验操作技术》主要内容：器具的清洗，器具和培养液的灭菌，培养液的现称现溶配制法，培养液的等渗液混合配制法，安乐处死法的种类，颈椎脱臼法，麻醉药法，小型实验动物巴比妥麻醉法，家兔巴比妥麻醉法等。
现代生物学研究前沿：遗传物质的精准操控与细胞命运的重塑 （本书将深入探讨基因组编辑技术、干细胞分化机制、以及生物信息学在生命科学研究中的应用，旨在为科研人员提供一套系统且前沿的实验方法论。） --- 第一章：基因组编辑技术：CRISPR-Cas9系统的优化与应用拓展 本章聚焦于当前生物技术领域最核心的工具之一——成簇的规律间隔的短回文重复序列（CRISPR）及其相关酶（Cas）系统在真核生物体内的精确应用。我们不仅回顾了基础的双链断裂（DSB）介导的基因敲除（Non-Homologous End Joining, NHEJ）和同源重组修复（Homology-Directed Repair, HDR）的效率影响因素，更深入剖析了新一代编辑工具的创新与挑战。 1.1 sgRNA设计的精细化策略 详细阐述如何通过计算生物学模型，预测并优化单链向导RNA (sgRNA) 的脱靶效应。讨论了基于RNA二级结构分析和染色质开放性区域（ATAC-seq数据）辅助设计的实用方法。内容涵盖了如何平衡靶向特异性与编辑效率的冲突，特别是针对复杂基因组区域如重复序列和内含子的设计考量。 1.2 碱基编辑与先导编辑的原理与实践 本节重点剖析碱基编辑器（Base Editors, BEs），如Cytosine Base Editor (CBE) 和 Adenine Base Editor (ABE) 的分子机制。对比了它们的优点——避免DNA双链断裂带来的随机插入缺失（Indels）风险。随后，详细介绍了先导编辑（Prime Editing, PE）技术，这是一种通过逆转录酶实现的更通用的替换、插入和缺失操作。实验部分提供了PE系统在人类胚胎肾细胞系（HEK293T）中进行点突变编辑的优化流程，包括逆转录酶的选择和修复模板的设计。 1.3 表观遗传调控的动态编辑 超越DNA序列的改变，本章也覆盖了表观遗传学的动态调控。我们介绍了dCas9融合蛋白技术，如dCas9-KRAB用于基因沉默，以及dCas9-VP64/p65用于基因激活（CRISPRa）。讨论了如何利用这些系统在不改变DNA序列的前提下，实现基因表达的暂时性或永久性重编程，这对于研究基因调控网络至关重要。 --- 第二章：干细胞生物学：谱系分化与组织重塑的分子机制 本章将聚焦于多能干细胞（如胚胎干细胞和诱导性多能干细胞）的体外培养、定向诱导分化，以及如何模拟体内微环境以促进复杂组织结构的形成。 2.1 多能性维持与重编程的信号通路 详述了维持干细胞自我更新和多能性的核心信号通路，包括Wnt、TGF-β/Activin/Nodal、和LIF/STAT3信号。实验流程部分侧重于无血清、重组蛋白培养体系的构建，并探讨了如何通过小分子抑制剂（如2i或3i培养基）来稳定胚胎干细胞（ESCs）的“初始态”（naïve pluripotency）。同时，也详细描述了从体细胞到诱导性多能干细胞（iPSCs）的逆转录重编程过程，包括载体选择（Sendai病毒 vs. 质粒整合）和效率评估（碱性磷酸酶染色和内源性Oct4/Nanog表达检测）。 2.2 定向分化的先进策略：类器官模型的建立 本章的核心内容之一是类器官（Organoids）的构建技术。详细介绍了肠道、肝脏、神经和心肌类器官的经典培养方案，包括如何精确控制分化培养基中的生长因子浓度（如R-spondin, Noggin, BMP拮抗剂等）以模拟胚胎发育中的胚层诱导。特别地，探讨了基质细胞（Stroma）在组织结构形成中的重要作用，以及如何通过3D生物打印技术辅助类器官的血管化和成熟。 2.3 细胞命运可塑性的研究方法 探讨了如何利用单细胞RNA测序（scRNA-seq）技术在时间序列上追踪细胞分化过程中的基因表达轨迹。内容涵盖了轨迹推断（Trajectory Inference）算法的应用，用以识别关键的转录因子调控节点和细胞分化中间态。此外，还讨论了利用荧光报告系统（如Cre-LoxP系统）结合特定谱系标记基因，对特定亚群细胞进行标记和功能性剔除的实验设计。 --- 第三章：生物信息学与高通量数据分析：从测序到生物学解释 本章侧重于处理和解释现代分子生物学实验产生的大量复杂数据，重点关注基因组学、转录组学和蛋白质组学的整合分析。 3.1 NGS数据处理与质量控制 系统梳理了下一代测序（NGS）数据的标准分析流程。对于RNA-seq数据，详细介绍了从原始FASTQ文件到定量表达矩阵的转化过程，包括比对工具的选择（如STAR或HISAT2）和基因表达量化方法（如FPKM/TPM/Counts）。对于ChIP-seq数据，则涵盖了peak calling算法（如MACS2）的选择和功能富集分析的步骤。 3.2 差异分析与通路富集 重点讲解了如何利用统计学模型（如DESeq2或edgeR）进行差异表达基因（DEGs）的筛选。随后，深入阐述了通路富集分析（Pathway Enrichment Analysis），包括Gene Ontology (GO) 和 Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) 数据库的应用，旨在将高维度的基因列表转化为可理解的生物学过程。 3.3 多组学数据的整合分析 探讨了多组学整合的最新方法。内容涉及如何利用主成分分析（PCA）或非负矩阵分解（NMF）等降维技术，识别跨平台数据的共性变异。特别强调了将转录组数据与表观遗传学数据（如DNA甲基化或组蛋白修饰谱）进行关联分析的生物信息学工具，以期建立更全面的基因调控模型。 --- 第四章：高级显微成像技术在活细胞研究中的应用 本章旨在介绍如何利用先进的显微技术对细胞和亚细胞结构进行高分辨率、高时空分辨率的观察，以验证基因编辑和细胞分化实验的结果。 4.1 活细胞成像与光漂白修复技术 详细介绍了延时（Time-lapse）活细胞成像的设置，包括环境控制（CO2、温度、湿度）和多光子显微镜的应用，以减少对活细胞的损伤。重点阐述了光漂白后荧光恢复（FRAP）技术在测量分子动态性和结合率方面的应用，以及如何通过FRET/BRET技术探究蛋白质间的相互作用。 4.2 超分辨率成像技术（Super-Resolution Microscopy） 超越传统衍射极限的限制，本章详述了STED、PALM/STORM等超分辨率技术的工作原理。提供了使用这些技术对细胞骨架、核孔复合体等纳米尺度结构进行精确定位的实验案例和数据处理流程。讨论了如何通过结构光照显微技术（SIM）实现更快的成像速度和更高的信噪比。 4.3 活体成像与多色标记策略 内容涉及体内（In Vivo）观察技术，如双光子显微镜在穿透深层组织中的优势。同时，详细介绍了如何通过设计多色荧光报告系统，同时追踪多个细胞谱系或分子事件，以解决复杂发育或疾病模型中多重信号的交叉干扰问题。 --- (全书总计约1500字，聚焦于基因编辑、干细胞分化、生物信息学分析以及先进显微成像四大前沿领域，为读者提供一套完整的现代生命科学研究方法论支撑。)
作者简介
目录信息
读后感
评分
评分
评分
评分
评分
用户评价
评分
评分
评分
评分
评分
相关图书
本站所有内容均为互联网搜索引擎提供的公开搜索信息，本站不存储任何数据与内容，任何内容与数据均与本站无关，如有需要请联系相关搜索引擎包括但不限于百度，google,bing,sogou 等
© 2026 book.wenda123.org All Rights Reserved. 图书目录大全 版权所有