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页数:164

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出版时间:2007-10

价格:17.50元

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isbn号码:9787562821502

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• 生物化学
• 实验
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• 实践教学

《现代分子生物学技术：从基础到前沿应用》 图书简介 本书旨在为生命科学领域的研究人员、高年级本科生及研究生提供一本全面、深入且紧跟时代步伐的分子生物学实验技术手册与理论参考。本书聚焦于当前生命科学研究中最核心、最前沿的实验技术体系，涵盖了从经典方法到新兴高通量技术的完整图景，强调实验设计、原理剖析、操作细节、数据分析及潜在陷阱的规避。 第一部分：分子生物学基础技术与核心操作 本部分奠定了扎实的分子生物学实验基础，确保读者能够熟练掌握进行任何高级实验的必备技能。 第一章：核酸的提取、纯化与定量 详细介绍了从不同生物材料（细菌、酵母、植物组织、哺乳动物细胞及组织）中提取高质量总RNA、基因组DNA和质粒DNA的优化方案。内容包括：基于苯酚-氯仿的经典方法、硅膜柱层析技术（Spin Column）的机制与优化、新型磁珠法提取的适用性。重点讲解了核酸纯度（A260/A280、A260/A230比值）和浓度（NanoDrop、Qubit体系）的精确测定与标准曲线的建立。 第二章：聚合酶链式反应（PCR）的深度解析 系统阐述了标准PCR、定量实时荧光PCR（qPCR）、逆转录PCR（RT-PCR）、以及高保真PCR技术（如Phusion酶的应用）。详细解析了PCR反应体系的优化，包括引物设计原则（Tm值、二级结构、二聚体预测）、酶的选择（Taq、热启动酶、Proofreading酶）及其对扩增效率和特异性的影响。qPCR部分深入探讨了溶解曲线分析、标准曲线法、ΔΔCt法的应用、以及SYBR Green与TaqMan探针技术的对比。 第三章：核酸的分子克隆与载体构建 全面覆盖了基因克隆的策略。从限制性内切酶的选择与消化、DNA的连接技术（T4 DNA Ligase的应用、粘性末端与平末端连接），到高效的转化方法（热激法、电穿孔法），以及筛选阳性克隆的技术（抗生素筛选、蓝白斑筛选）。重点讨论了现代高效克隆技术，如Gibson Assembly、重组酶介导的克隆（TOPO TA Cloning）以及Gateway克隆系统的原理与应用流程。 第四章：凝胶电泳与印迹分析技术 详细介绍了琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的分离原理、缓冲液体系的选择、上样浓度与电压的匹配。在蛋白质分析部分，着重讲解了SDS-PAGE、2D电泳（含等电聚焦）的详细步骤。印迹技术方面，系统阐述了Southern Blotting（DNA检测）、Northern Blotting（RNA检测）和Western Blotting（蛋白质检测）的膜转移、抗原抗体孵育、显色（化学发光与底物选择）的全过程，并提供了增强信号和减少背景噪音的实用技巧。 第二部分：蛋白质组学与细胞生物学技术 本部分聚焦于蛋白质的表达、修饰、相互作用研究，以及对活细胞或组织样本的深入分析。 第五章：重组蛋白的表达、纯化与活性检测 指导读者设计高效的蛋白质表达系统，包括原核表达系统（大肠杆菌BL21、Rosetta）和真核表达系统（酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞）。重点解析了亲和标签技术（His-tag、GST-tag、MBP-tag）的筛选与去除。纯化章节详细介绍了亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析的原理、操作参数设置以及层析柱的再生与维护。同时，包含了酶活测定（如Coulox/NADPH体系）、Western Blot验证及蛋白质稳定性的评估方法。 第六章：免疫学与细胞凋亡/增殖分析 深入探讨了基于抗体的检测技术。除了前述的Western Blot，还详细介绍了酶联免疫吸附测定（ELISA）的间接法、双抗夹心法和竞争法，及其在定量分析中的精确控制。细胞学方面，涵盖了流式细胞术（FACS）的基础，包括细胞凋亡（Annexin V/PI染色）、细胞周期分析、以及特定标志物（如CD分子）的荧光标记与上机操作。 第七章：细胞培养与无菌操作的精要 系统阐述了从基础到高级的细胞培养技术。涵盖了原代细胞的分离与培养、永生化细胞株（2D贴壁培养、3D球状培养）的维护、细胞冻存与复苏的最佳实践。无菌操作部分强调了生物安全柜的使用规范、培养基的配制与过滤灭菌、以及对支原体等常见污染的检测与处理。 第三部分：基因组学与高通量测序技术 本部分覆盖了当前生命科学研究中最热门的基因组编辑和大规模数据生成技术。 第八章：CRISPR/Cas9基因编辑技术全流程 详细介绍了CRISPR/Cas9系统的作用机制，包括sgRNA的设计原则（靶点选择、脱靶预测）、Cas9核酸酶的递送策略（质粒转染、mRNA递送、RNP复合物递送）。实验验证部分，重点阐述了如何使用T7 Endonuclease I（T7E1）分析法、高分辨率熔解曲线（HRM）法以及直接测序法来评估基因编辑效率和准确性。 第九章：新一代测序（NGS）技术导论与文库构建 本书对NGS技术的原理进行了清晰的梳理，重点放在Illumina测序平台。涵盖了宏基因组学（Shotgun vs 16S）、转录组学（Total RNA-Seq vs mRNA-Seq）的文库构建流程。详细描述了DNA片段化、接头连接（Adapter Ligation）、片段筛选（AMPure Beads或电泳）以及文库的质控（TapeStation/Bioanalyzer、qPCR定量）标准。 第十章：高通量数据分析基础与质量控制 强调实验技术与生物信息学分析的紧密结合。本章介绍了原始测序数据（FASTQ文件）的质量控制标准（使用FastQC软件），数据预处理（Trimming/Filtering）。对于转录组数据，简要介绍了比对流程（如STAR）、定量（FPKM/TPM/Counts）及差异表达基因（DEG）的筛选策略（DESeq2/EdgeR）。 附录：安全、规范与常见问题故障排除 提供了详尽的实验室安全操作规程（化学品、生物危害、辐射安全），常用缓冲液和培养基的配方，以及针对PCR不特异性扩增、Western Blot条带拖尾、细胞污染等常见实验问题的系统化故障排除流程图。 本书内容组织逻辑清晰，图表丰富，旨在成为一本实用性强、覆盖面广、能够指导读者高效完成复杂实验项目的权威性参考书。

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从整体内容布局来看，这本书的逻辑推进非常顺畅，给人一种层层递进的学习体验。它似乎没有一上来就抛出高难度的内容，而是先用相对基础的实验夯实地基，然后逐步过渡到更具挑战性的分子生物学技术或者代谢路径的验证实验。这种由浅入深的设计，非常适合自学或者作为课程配套用书。我特别关注了它对安全规范的强调程度，毕竟在实验室工作，安全永远是第一位的。如果它能将操作安全、废液处理等内容系统地整合在每个实验章节中，那就更完美了，能让学习者在掌握技术的同时，养成良好的实验室习惯。

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这本教材的语言风格非常严谨、专业，读起来有一种扎实可靠的感觉。它不像有些科普读物那样用过于轻松的口吻，而是直接深入到科学的本质，每一个术语的解释都力求精确无误，这对我们这些需要将理论应用于实际操作的人来说至关重要。我特别欣赏它在介绍实验原理时，总是能将理论基础和实际操作紧密结合起来，让你明白“为什么”要这么做，而不是简单地罗列操作步骤。这种深层次的讲解方式，有助于读者构建起完整的知识体系，而不是死记硬背流程。我希望能从中领悟到一些解决实验中突发问题的思路和方法，而不仅仅是照本宣科地完成任务。

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这本书的封面设计得很朴实，没有花哨的图案，主要是白底黑字，标题和作者信息清晰可见。拿到手里感觉分量不轻，纸张质量看起来相当不错，内页的排版也比较舒服，字体大小适中，图表的位置安排得也很合理，让人在阅读时不会感到眼睛疲劳。我一直都在寻找一本既能系统讲解基础理论，又能提供足够详实实验步骤的参考书，这本的目录结构看起来很完整，从基础概念的引入到复杂的分子操作都有覆盖，感觉作者在这方面下了不少功夫，对实验细节的把控似乎非常到位，光是看目录就能感受到它的深度。尤其是对一些经典实验方法的描述，我相信会非常详尽，这对于初学者来说简直是福音，能省去很多摸索的时间。

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我注意到这本书在图示方面做得非常出色。很多实验步骤，尤其是那些涉及精细操作和仪器使用的部分，配有清晰的流程图和实物照片，这比单纯的文字描述要直观得多。我曾经在做某些复杂的离心分离实验时遇到困难，原因就是书面描述总是难以把握那个“度”，有了高质量的图片辅助，我相信能大大降低操作失误的概率。这些图例似乎都是针对实际操作中容易出错的环节精心挑选和绘制的，细节处理得非常到位，比如如何正确地贴标签、如何避免气泡的产生等等，这些“小窍门”往往是教科书中最容易被忽略但却是最实用的部分。

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这本书的装帧设计虽然朴素，但透着一股历经考验的专业气息，一看就知道是经得起高频翻阅和实验台上“磨练”的工具书。我尤其关注了它在数据分析和结果解读部分所占的篇幅和深度。在现代科学研究中，实验做完只是完成了一半，如何准确地解读杂乱的数据、如何用统计学方法验证实验结果的可靠性，才是决定研究成败的关键。如果这本书在这部分能提供详尽的案例分析和常用软件的应用指导，那它的实用价值将得到指数级的提升，真正成为实验室中不可或缺的“右脑”。

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