生理學實驗指南 pdf epub mobi txt 電子書 下載2026

簡體網頁||繁體網頁

☆☆☆☆☆

出版者:科學

作者:項輝

出品人:

頁數:210

译者:

出版時間:2008-3

價格:28.00元

裝幀:

isbn號碼:9787030210869

叢書系列:

圖書標籤:

• 生理學
• 實驗
• 醫學
• 生物學
• 教學
• 指南
• 大學
• 本科
• 實驗指導
• 生命科學

《生物化學與分子生物學實驗技術：從基礎到前沿》 書籍簡介 《生物化學與分子生物學實驗技術：從基礎到前沿》是一本全麵、深入且緊密結閤當前生命科學研究熱點的實驗技術手冊。本書旨在為生物化學、分子生物學、細胞生物學以及相關交叉學科（如生物工程、藥物研發）的本科生、研究生以及科研人員提供一套係統、詳盡且實用的實驗指導。我們深知，紮實的實驗技能是科學研究的基石，因此本書力求在理論闡述與實際操作之間架起一座堅實的橋梁。 本書的結構與特色 全書內容經過精心組織和編排，共分為六個核心部分，涵蓋瞭現代生物化學與分子生物學實驗的經典技術與新興方法。 --- 第一部分：生物分子基礎操作與質量控製 本部分聚焦於實驗的起點——樣品的製備、純化與質量評估。 1. 緩衝液與試劑的精確配製： 詳細介紹瞭各類常用緩衝液（如Tris-HCl, PBS, HEPES, EDTA等）的理論依據、配製步驟、pH值的精確校準方法，以及儲存條件。特彆強調瞭無菌操作和高純度水的使用標準。 2. 蛋白質的提取、定量與初步純化： 涵蓋瞭細胞勻漿（超聲波、高壓勻漿、研磨法）的選擇與優化；不同組織和細胞類型的裂解液配方及其適用性分析。蛋白質濃度的測定，重點對比瞭Bradford法、Lowry法、BCA法及紫外吸收法的優缺點和乾擾因素。初步純化技術包括鹽析法（硫酸銨分級沉澱）的動力學原理和操作流程。 3. 核酸的提取與純化： 詳細闡述瞭基因組DNA、質粒DNA、總RNA以及mRNA的選擇性提取方法。對於植物組織、動物組織、血液、微生物等不同來源的樣本，提供瞭優化的酚氯仿抽提法、商業化柱式純化試劑盒的操作規範，並深入探討瞭RNA易降解的原因及DEPC水和RNase-free操作環境的建立。 4. 樣品儲存與質量檢測： 討論瞭生物大分子在不同溫度、pH值下的穩定性，凍融循環對生物活性的影響。通過凝膠電泳對提取物的初步質量進行判斷（完整性、降解程度）。 --- 第二部分：電泳與層析分離純化技術 這是實現高純度分離的關鍵技術模塊。 1. 聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE) 的精講： 詳細講解瞭SDS-PAGE的分離原理、膠體的配製（從5%到20%不等）、電泳條件（電壓、時間）的優化。重點分析瞭還原性與非還原性電泳的應用場景，並對電泳條帶的判定、蛋白質分子量的準確估計進行瞭詳盡的指導。 2. 等電聚焦電泳 (IEF) 與雙嚮電泳 (2D-PAGE)： 介紹瞭IEF的原理及其在分析蛋白質等電點方麵的應用。2D-PAGE作為蛋白質組學的基礎工具，詳細分解瞭第一嚮（IEF）和第二嚮（SDS-PAGE）的銜接技術和操作難點。 3. 凝膠過濾層析 (Gel Filtration Chromatography)： 闡述瞭根據分子大小進行分離的原理，重點講解瞭不同孔徑凝膠介質的選擇，以及洗脫麯綫的繪製與分析，用於分子量測定和緩衝液置換。 4. 離子交換層析 (Ion Exchange Chromatography)： 深入探討瞭陽離子和陰離子交換介質的選擇，梯度洗脫麯綫的設計（包括綫性梯度和階梯梯度），以及層析峰的收集與分析。 5. 親和層析 (Affinity Chromatography)： 重點介紹瞭利用標簽（如His-tag, GST, MBP）進行純化的原理與實踐，包括配體固定化、上樣條件、洗脫條件（咪唑濃度、pH變化）的精確控製，是高純度目標蛋白製備的首選方法。 --- 第三部分：分子生物學核心技術實踐 本部分聚焦於基因的剋隆、擴增與檢測。 1. PCR及其高級應用： 全麵覆蓋瞭標準PCR、熱啓動PCR、Taq酶的選擇與優化。重點解析瞭定量PCR (qPCR/Real-time PCR) 的設計原則、熒光染料法（SYBR Green）與探針法（TaqMan）的差異，以及熔解麯綫分析在特異性驗證中的作用。 2. 基因剋隆與載體構建： 詳細介紹瞭限製性內切酶的酶切反應條件優化、DNA的連接反應（T4 DNA Ligase）的原理與操作。對剋隆載體的選擇（錶達載體、穿梭載體）及轉化（熱激法、電擊法）操作進行瞭詳盡指導，並提供瞭菌落PCR篩選的標準化流程。 3. 基因測序與分析： 介紹瞭Sanger測序的原理、引物設計要求以及測序結果的解讀。簡要概述瞭新一代測序（NGS）的基礎概念及其在實驗設計中的初步應用。 4. 基因錶達分析： 除瞭qPCR外，本章還詳細介紹瞭Northern Blotting（RNA印跡）的技術步驟，包括RNA的電泳轉移、探針的標記（放射性與非放射性）、雜交條件（溫度、時間）的精確控製以及顯影過程。 --- 第四部分：蛋白質功能與相互作用研究 本部分側重於對蛋白質本身特性和其在體係內行為的解析。 1. 蛋白質印跡 (Western Blotting)： 詳盡描述瞭從抗原提取到膜轉移（濕轉與半乾轉）、封閉、一抗/二抗孵育、顯影（化學發光與底物選擇）的全過程。重點講解瞭信號強度的半定量分析方法和抗體的選擇標準。 2. 酶活性測定： 介紹瞭通用酶活測定原理（如分光光度法、熒光法），並以幾種重要的代謝酶（如LDH, SOD）為例，提供瞭詳細的實驗方案和單位換算標準。 3. 免疫沉澱 (Co-IP) 與蛋白質相互作用研究： 詳細闡述瞭免疫沉澱技術用於捕獲特定蛋白及其復閤物的原理。重點在於抗體的選擇、洗脫條件的溫和性，以及後續的檢測方法（如Western Blotting鑒定互作蛋白）。 4. 蛋白質的結構研究導論： 介紹瞭Circular Dichroism (CD) 光譜法在測定蛋白質二級結構含量及穩定性研究中的應用。 --- 第五部分：細胞與組織培養技術 本部分是進行生物學功能研究的基礎。 1. 細胞培養環境的建立與維護： 詳細介紹瞭培養箱、CO2濃度、濕度的控製標準。層流超淨工作颱的無菌操作規範，以及培養基的配製、血清的篩選與滅活。 2. 原代細胞與傳代細胞係的培養： 針對不同來源的細胞（如貼壁細胞、懸浮細胞），提供瞭分離、消化、傳代、凍存與復蘇的詳細SOP（標準操作規程）。 3. 細胞轉染與基因導入： 對比瞭脂質體介導、磷酸鈣沉澱法和電穿孔法在瞬時轉染和穩定細胞株建立中的適用性，並提供瞭轉染效率的評估方法。 4. 細胞活力與凋亡檢測： 介紹瞭MTT/CCK-8法、颱盼藍拒染法等評估細胞增殖和活力的經典方法。同時，詳細闡述瞭Annexin V-FITC/PI雙染法在流式細胞儀上檢測細胞凋亡的實驗方案。 --- 第六部分：生物成像與高通量技術簡介 本部分展望瞭現代生物學實驗的前沿工具。 1. 熒光顯微技術基礎： 涵蓋瞭明場、相差、熒光顯微鏡的基本操作。重點解析瞭共聚焦顯微鏡（Confocal Microscopy）的成像原理、Z軸掃描、3D重建，以及熒光漂白（FRAP）在分子動態研究中的應用。 2. 免疫熒光與免疫組化 (IHC/IF)： 詳細介紹瞭組織或細胞的固定、透化、抗原修復的優化過程。一抗和二抗的孵育條件，以及熒光標記物（如DAPI, FITC, Rhodamine）的選擇與兼容性。 3. 基礎流式細胞術 (FACS)： 介紹瞭流式儀器的基本結構，細胞上樣的注意事項，以及通過熒光標記物進行細胞分群、計數和錶型分析的實驗設計。 結論 《生物化學與分子生物學實驗技術：從基礎到前沿》不僅僅是一本操作指南，更是一部實驗思維的養成手冊。書中穿插瞭大量“實驗優化實例”、“常見錯誤與排除”以及“安全注意事項”，旨在幫助學習者從“按部就班”的執行者，成長為能夠獨立設計、優化和解決復雜實驗問題的研究者。本書的詳盡和係統性，確保瞭讀者能夠掌握從樣品采集到數據分析的全鏈條實驗技能。

評分☆☆☆☆☆

評分☆☆☆☆☆

評分☆☆☆☆☆

評分☆☆☆☆☆

評分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆

评分☆☆☆☆☆