Guide to Protein Purification pdf epub mobi txt 电子书 下载 2026

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出版者:Academic Pr

作者:Deutscher, Murray P. (EDT)

出品人:

页数:894

译者:

出版时间:1990-3

价格:$ 224.87

装帧:HRD

isbn号码:9780121820831

丛书系列:

图书标签:

• 蛋白质纯化
• 生物化学
• 分子生物学
• 实验技术
• 蛋白质组学
• 实验室指南
• 生物技术
• 生命科学
• 蛋白质分析
• 纯化方法

《分子生物学前沿：高级蛋白质组学与结构解析技术》 内容提要 本书深入探讨了当前分子生物学研究领域最前沿的蛋白质组学技术、高级蛋白质分离与纯化策略，以及蛋白质结构解析的最新进展。重点聚焦于从复杂生物样品中系统性地识别、定量和功能表征蛋白质组的挑战与解决方案，并详细阐述了用于揭示蛋白质三维结构和相互作用网络的尖端技术。全书内容覆盖了从样品制备、高分辨率分离、高通量质谱分析，到计算结构生物学的各个关键环节，旨在为生命科学、生物技术和药物研发领域的科研人员提供一本兼具理论深度与实践指导的权威参考手册。 --- 第一部分：蛋白质组学的高级策略与挑战 第一章：复杂生物样本的预处理与优化 本章详细解析了针对不同生物基质（如组织、细胞培养物、体液）的蛋白质提取和溶解优化方案。重点讨论了如何最大限度地减少蛋白酶降解和翻译后修饰（PTM）的失真。内容包括：新型裂解缓冲液的配方设计、细胞器分离技术在蛋白质组学中的应用、以及克服膜蛋白和高丰度蛋白干扰的预处理策略。此外，章节对冷冻干燥、透析、超滤等初步纯化步骤在维持蛋白质天然构象方面的重要性进行了深入分析。 第二章：高分辨率二维电泳（2D-E）与差异蛋白质组学 尽管质谱技术日益成熟，二维电泳（2D-E）仍是分析蛋白质等电点（pI）和分子量分布的黄金标准。本章详述了最新的等电聚焦（IEF）技术进步，包括载胶条的化学性质优化、聚焦条件的精确控制（如：温度梯度和扫描速率）。随后，章节转向差异蛋白质组学的数据解读，重点介绍如何使用图像分析软件（如Delta2D, Progenesis）进行精确的斑点定量、匹配和生物学意义的关联分析，特别关注低拷贝数和修饰态蛋白质的检测。 第三章：定量蛋白质组学：从标记到数据依赖采集（DDA） 本部分全面覆盖了定量蛋白质组学中的核心技术。首先介绍基于稳定同位素标记的方法，包括SILAC（稳定同位素标记的氨基酸追踪）和TMT/iTRAQ（串联质标签）技术的最新迭代和应用案例。详细阐述了标记效率、标记后处理对质谱信号的影响。接着，章节深入探讨了数据依赖采集（DDA）模式下的定量策略，包括碎片离子定量（Precursor Ion Quantitation）和如何利用高分辨率质谱仪（如Orbitrap Fusion Lumos）提高定量精度和动态范围。 第四章：数据非依赖采集（DIA）与深度蛋白质组分析 数据非依赖采集（DIA）正迅速成为定量蛋白质组学的主流。本章系统地介绍了DIA原理、数据采集策略（如SWATH-MS、YAMAT-MS），以及复杂的数据处理流程。核心内容包括：构建高质量的“光谱库”（Spectral Library）的方法、不同窗口大小对覆盖率的影响、以及最先进的DIA数据反卷积算法（如Spectronaut, OpenSWATH）的比较与选择标准。本章强调了DIA在实现高通量、高重复性定量分析中的核心优势。 --- 第二部分：高级蛋白质结构与相互作用解析 第五章：冷冻电子显微镜（Cryo-EM）的原理与实践 冷冻电子显微镜（Cryo-EM）已彻底改变了蛋白质结构生物学。本章专注于单颗粒分析（SPA）的流程，从样品制备（玻璃化冰的质量控制）、数据采集（直接电子探测器和剂量分割技术），到图像处理（CTF估计、2D分类、3D重建）。重点讨论了低信噪比数据中结构解析的挑战，以及如何通过倾斜数据采集（Tilted Acquisition）和运动校正技术提高分辨率。同时，章节也涵盖了结合使用单粒子分析和断层扫描（Cryo-ET）技术解析细胞内大分子机器的最新进展。 第六章：X射线晶体学的高级技术与难题解决 本章回顾了蛋白质晶体学的基础，并侧重于解决高级结构解析中的瓶颈问题。内容包括：蛋白质晶体生长优化（利用机器人筛选和微流控技术）、结构因子缺失（Phasing）的最新策略（如高能同步辐射源的SAD/MAD技术），以及利用分子置换法（MR）解决新结构难题的计算流程。此外，章节还探讨了针对柔性蛋白和膜蛋白的晶体学方法，如晶体束线同步辐射成像技术。 第七章：蛋白质相互作用组（Interactome）的系统分析 理解蛋白质如何协同工作，需要精确描绘其相互作用网络。本部分介绍了捕获和验证蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）的系统性方法。内容涵盖：基于酵母双杂交（Y2H）的改进、亲和沉淀结合质谱（AP-MS）中的“勾样控制”（Bait Control）的严格设计、以及生物物理学方法在验证PPI强度和动力学中的应用（如表面等离子共振SPR和生物层干涉BLI）。特别关注了靶向性蛋白质复合物解析的技术，如Cross-linking Mass Spectrometry (XL-MS) 在锁定复合物界面上的应用。 第八章：蛋白质翻译后修饰（PTM）的鉴定与功能分析 PTM是调控蛋白质功能的核心机制。本章专注于如何使用多级质谱技术（MS/MS, MS3）对磷酸化、糖基化、泛素化等关键PTM进行高精度鉴定和位点定位。详细介绍了富集策略，例如针对磷酸肽的金属离子亲和层析（IMAC）和抗体捕获。章节的最后部分将PTM数据与结构信息相结合，讨论如何通过结构建模来预测特定修饰对蛋白质功能域活性和相互作用的影响。 --- 第三部分：整合性分析与计算模型 第九章：整合组学数据与生物信息学管线 现代蛋白质组学产生海量数据，要求强大的整合分析能力。本章指导读者建立高效的生物信息学管线。内容包括：原始数据质量控制（QC）、不同平台数据（质谱、基因表达、代谢组学）的标准化处理、以及多组学数据融合的统计模型（如PLS-DA, Multi-Omics Factor Analysis）。重点介绍了利用网络分析工具（如STRING, Cytoscape）来构建和可视化蛋白质功能网络，并识别关键的调控枢纽。 第十章：蛋白质功能预测与结构模拟 本章聚焦于利用计算方法预测蛋白质的功能状态。内容覆盖：基于序列的蛋白质结构域和折叠预测算法的比较、同源建模（Homology Modeling）的准确性评估。特别关注分子动力学模拟（MD Simulation）在探究蛋白质柔性、构象变化以及药物分子结合过程中的应用。章节最后探讨了如何利用人工智能/机器学习模型，整合高通量筛选数据，以提高对新靶点蛋白质功能和药物敏感性的预测能力。 --- 本书特色 技术驱动的深度解析： 不停留于理论介绍，提供具体的技术参数设置和常见问题排除指南。 跨平台整合视角： 强调如何将分离科学、质谱技术与结构生物学数据有效整合。 面向实际应用： 案例分析聚焦于新药靶点发现、疾病生物标志物鉴定和疫苗开发中的前沿应用。 面向未来： 涵盖了空间蛋白质组学（Spatial Proteomics）和单细胞蛋白质组学等新兴技术的发展方向。

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