生物化学实验教程(第2版)

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出版者:世界图书出版公司
作者:
出品人:
页数:145
译者:
出版时间:1998-06
价格:18.00
装帧:平装
isbn号码:9787506237321
丛书系列:
图书标签:
  • 生物化学
  • 实验
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具体描述

现代分子生物学技术与应用 第一章 基因克隆与重组DNA技术 本章系统介绍了分子生物学研究中最核心的技术——基因克隆。从酶的性质与选择(如限制性内切酶、DNA连接酶、逆转录酶等)开始,详细阐述了不同类型载体的构建与优化,包括质粒、噬菌体、人工染色体等。重点剖析了目的基因的获取途径,如PCR扩增、cDNA文库构建与筛选、基因组文库的构建与筛选等。 在重组DNA技术的实践操作层面,本章深入探讨了转化、转染技术,并对不同宿主细胞(大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞)的转化效率影响因素进行了细致分析。此外,还涵盖了基因编辑的初步概念,如CRISPR/Cas9系统的基础原理及其在基因敲除、定点突变中的应用前景。本章旨在为读者打下坚实的基因操作基础,使其能够独立设计并完成复杂的基因操作实验。 第二章 蛋白质的表达、纯化与结构分析 本章聚焦于功能蛋白的获取与解析。在蛋白质表达方面,详细对比了原核和真核表达系统的优劣,并指导读者如何根据目标蛋白的性质选择合适的表达系统和诱导策略。针对表达产物常遇到的错误折叠、包涵体形成等问题,提供了详尽的解决和复性方案。 蛋白质纯化是本章的重点,涵盖了从粗提液澄清到最终纯化的全流程。层析技术被系统介绍,包括亲和层析(如His-tag、GST-tag的利用)、离子交换层析、分子筛层析和疏水作用层析。每种层析的原理、操作步骤、洗脱条件优化以及过程中的质量控制点被清晰描述。 蛋白质结构分析部分,着重介绍了SDS-PAGE、Western Blotting(免疫印迹)用于定性和定量分析,以及更高阶的技术如质谱法在蛋白质鉴定和翻译后修饰分析中的应用。 第三章 核酸的分子生物学检测与定量 本章全面覆盖了核酸(DNA和RNA)的定性与定量检测技术。PCR(聚合酶链式反应)作为基础,详细讲解了标准PCR、反转录PCR(RT-PCR)、定量实时荧光PCR(qPCR)的反应体系构建、引物设计原则、退火温度优化及数据分析方法。对于qPCR,特别强调了内参基因的选择、标准曲线的绘制和溶解曲线分析。 在DNA测序方面,本章介绍了桑格测序的原理及其在小片段验证中的应用,并对新一代测序技术(NGS)的基本流程和数据输出格式做了概览介绍,旨在帮助读者理解现代高通量测序的流程起点。 对于RNA的分析,除了RT-qPCR外,还详细介绍了Northern Blotting(用于检测RNA分子大小和丰度)和microRNA(miRNA)的检测与调控研究策略。 第四章 细胞生物学实验技术基础 本章将分子生物学技术融入细胞体系。内容涵盖了细胞系的建立、维持、传代和冻存的标准化操作流程。重点讨论了细胞增殖与凋亡的检测方法,如MTT、CCK-8法、Annexin V/PI染色流式细胞术。 细胞转染/转导效率的优化是本章的关键实践点,包括脂质体介导、电穿孔法等。此外,详细介绍了免疫荧光(IF)和免疫细胞化学(ICC)的固定、通透化、封闭和一抗/二抗孵育等步骤,用于观察目标蛋白在细胞内的定位和表达水平。 第五章 蛋白质相互作用研究 理解蛋白质如何在复杂的细胞环境中协同工作,需要高效的相互作用研究技术。本章首先详述了体外互作研究方法,如酵母双杂交(Y2H)系统的原理、筛选策略及假阳性控制。 随后深入探讨了体内(in vivo)和近体内(near-vivo)技术。重点介绍了Co-IP(共免疫沉淀)的实验设计,包括抗体选择、洗脱条件优化和WB验证的细节。并对成熟的体内技术如FRET(荧光共振能量转移)和BioID(生物素化亲和标记)在解析互作网络中的应用进行了技术性讲解。 第六章 基因功能验证与表观遗传学方法 本章侧重于验证基因的生物学功能。在基因过表达和基因沉默方面,系统对比了载体介导的过表达与shRNA/siRNA干扰策略的效率和特异性。对于shRNA/siRNA,详细指导了靶点选择、文库筛选及验证过程。 表观遗传学研究方法作为前沿内容被引入,包括ChIP(染色质免疫沉淀)技术的完整流程,从交联、打断、免疫沉淀到下游的qPCR或NGS分析,用于研究特定转录因子或组蛋白修饰因子在基因组上的结合位点。 第七章 动物模型构建与体内功能分析 本章将实验推向体内系统。详细介绍了转基因小鼠、基因敲除(KO)、基因敲入(KI)小鼠的构建策略,并阐述了病毒载体(AAV、慢病毒)在体内递送基因或干扰序列的方法。 在体内功能分析部分,着重讲解了疾病模型的建立(如肿瘤模型、代谢疾病模型),以及如何利用非侵入性技术和分子探针进行体内监测。同时也讨论了动物实验的伦理规范和统计学处理的要求。 附录:实验室安全、设备维护与数据管理 附录部分提供了实验室常规安全操作规范,特别是涉及高风险化学品(如甲醛、DMSO)、生物危害性材料(BSL-2规范)的处理指南。同时,给出了常用设备的日常维护清单(如超速离心机、梯度PCR仪的维护),并强调了实验数据的电子化管理、备份及规范化记录的重要性。

作者简介

目录信息

目 录
实验室规则
第1章 生化实验基本操作
1.1 玻璃仪器的洗涤与清洁
1.2 清洗液的原理与配制
1.3 吸量管的种类和使用
1.4 溶液的混匀
1.5 过滤
1.6 离心机的使用方法
第2章 实验样品的制备
2.1 血液样品
2.2 尿液样品
2.3 组织样品
第3章 分光光度法
3.1 分光光度法
3.2 分光光度法在生物化学中的应用
3.3 分光光度计的结构
实验1 紫外光度法测定蛋白质含量
实验2 改良Lowry氏法测定蛋白质含量
实验3 双缩脲(Biuret)法测定蛋白质含量
实验4 动物组织中基因DNA 的提取
实验5 肝组织核酸的提取和鉴定
实验6 酵母细胞核酸的提取和组分鉴定
实验7 5’-腺苷酸酶活性测定
实验8 酵母细胞核酸的定量测定(定磷法)
实验9 改良Mohum法测定血清谷-丙转氨酶活性
实验10 血清无机磷的定量测定
实验11 过氧化脂质测定
实验12 酵母利用无机磷的测定
第4章 层析法
4.1 分类
4.2 层析中的常用术语
4.3 纸层析
4.4 薄层层析
4.5 离子交换层析
4.6 凝胶层析
4.7 亲和层析
实验13 血清脂类硅胶G薄层层析
实验14 氨基酸的薄层层析
实验15 氨基酸单向纸层析
实验16 聚酰胺薄膜层析鉴定成人型血红蛋白N-末端氨基酸
实验17 葡聚糖凝胶SephadexG-50柱层析分离脲酶-胰岛素混合液
实验18 葡聚糖凝胶SephadexG-50柱层析分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶
混合液
实验19 血清γ-球蛋白的分离纯化
实验20 凝胶层析分离血红蛋白与鱼精蛋白
实验21 离子交换层析分离混合氨基酸
第5章 电泳法
5.1 电泳的基本原理
5.2 影响电泳的主要因素
5.3 区带电泳的分类
5.4 几种常见的电泳方法
实验22 血清蛋白质乙酸纤维素薄膜电泳定量测定
实验23 血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳――盘状电泳
实验24 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
实验25 碱性磷酸酶(AKP)同工酶的分离与测定
实验26 乳酸脱氢酶同工酶的分离与测定
实验27 等电聚焦电泳分离血红蛋白
第6章 离心分离技术
6.1 原理
6.2 分类
实验28 细胞核分离和核酸、蛋白质含量测定
第7章 蛋白质、酶、核酸
实验29 蛋白质的沉淀反应
实验30 酪蛋白等电点的测定
实验31 凯氏微量定氮法
实验32 酪氨酸酶的催化作用
实验33 影响酶促反应的因素
实验34 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制
实验35 蔗糖酶的专一性
实验36 碱性磷酸酶的提取和比活性测定
实验37 碱性磷酸酶米氏常数的测定
实验38 过氧化氢酶Km的测定
实验39 酵母蔗糖酶Km值的测定
第8章 临床生化实验
实验40 邻甲苯胺法测定血糖
实验41 饥饿和饱食对肝糖原含量的影响
实验42 胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响
实验43 血清甘油三酯含量测定
实验44 血清总胆固醇含量测定
实验45 高密度脂蛋白中胆固醇含量的测定
实验46 草酸盐-高锰酸钾滴定法测定血清钙
实验47 二乙酰一肟显色法测定尿素氮
实验48 食物中维生素C的提取和定量
附 录
一、待测溶液和选用滤光片的对应关系
二、化学试剂纯度分级表
三、实验室常用酸碱的比重和浓度
四、不同温度时标准缓冲溶液的pH值
五、缓冲溶液的配制
六、离心机转速与离心力的换算
七、元素原子量表
八、硫酸铵饱和度常用表
九、紫外吸收法测定蛋白质含量的校正因子
十、单位换算
· · · · · · (收起)

读后感

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用户评价

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这本新版的《材料科学基础》真是让人眼前一亮。我作为一名多年的材料学研究者,深知教材的更新速度跟不上行业发展的步伐。但这次的第二版,显然是下了大功夫的。它不仅保留了原有的经典理论框架,比如晶体结构、相图解析这些核心内容,还非常及时地融入了近些年新兴的热点,比如高熵合金的最新进展,以及在增材制造(3D打印)背景下对材料微观结构控制的新思考。阅读过程中,我发现它在解释复杂概念时,采用了大量高清的显微照片和精妙的示意图,这对于初学者来说简直是福音,能迅速建立起直观的认识。尤其值得称赞的是,书中在每一章后附带的“案例分析”部分,不再是简单的习题,而是紧密结合工业实际的应用场景,比如新型电池电极材料的设计思路,或是航空发动机叶片的热障涂层失效分析,让理论学习立刻拥有了落地的价值感。总的来说,这本书的深度和广度都达到了一个非常高的平衡点,无论是本科高年级学生还是初入科研领域的硕士生,都会觉得物超所值,是案头必备的参考书。

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我是一名正在准备考研的文科生,选择《西方哲学史导论(增订版)》完全是出于好奇,想对西方思想脉络有个宏观的把握。坦白讲,哲学书向来以晦涩难懂著称,但我翻开这本书后,悬着的心就放下了大半。编著者高明之处在于,他们似乎深谙“隔行如隔山”的阅读障碍。他们没有一开始就抛出康德或黑格尔的艰深术语,而是从古希腊城邦的社会背景切入,将苏格拉底的对话精神放置于具体的历史场景中去理解。对于柏拉图的“理念论”,作者巧妙地运用了类比——将一个清晰的几何图形与我们对“正义”这个抽象概念的追寻相类比,一下子就让抽象的概念具象化了。全书的结构安排也极为合理,总能在我快要迷失在各种学派的争论中时,及时出现一个清晰的总结段落,将前后的脉络重新梳理清晰。阅读体验极佳,感觉像有一位耐心的老师在身旁陪伴讲解,而非冷冰冰的文字堆砌。

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说实话,我本来对这种教科书式的理论书籍不抱太大期望,毕竟市面上类似的读物太多了,大多是堆砌公式和定义。然而,《环境生态学原理(修订版)》彻底颠覆了我的看法。这本书的叙事方式非常流畅,它不像是在“教”你知识点,更像是在“引导”你思考。作者的文笔极富感染力,尤其是在讨论生物多样性丧失和气候变化这些宏大议题时,能让人真切地感受到地球系统的复杂与脆弱。我特别欣赏它在理论阐述中穿插的哲学思辨。比如,在讲解生态位理论时,作者没有停留在物种竞争的数学模型上,而是深入探讨了人类活动对自然系统稳定性的干预边界问题,这为我的生态规划工作提供了新的伦理和操作层面的参考。书中的图表设计也十分用心,那些复杂的能量流动网络图,色彩搭配和谐且逻辑清晰,即便是复杂的生物地球化学循环,也能被梳理得井井有条。这本书不仅仅是知识的集合,更是一部引人深思的生态智慧之作。

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作为一名软件工程师,我一直觉得纯粹的计算机理论书籍过于偏向抽象的算法和数据结构,实用性稍显不足。但《网络安全与攻防实践(第3版)》却让我找到了理论与实战的完美结合点。这本书的重点完全放在了“如何做”和“为什么会失败”上。它没有浪费篇幅去讨论过时的加密算法,而是直接深入到最新的零信任架构、Web应用漏洞(如最新的Server-Side Request Forgery, SSRF)的实战挖掘过程。最让我印象深刻的是,书中针对每一次攻击描述,都配有详细的防御对策和代码示例,而且这些代码都是在当前主流开发框架下测试过的,可操作性极强。例如,在讲解SQL注入时,它不仅仅给出了预编译语句的解决方案,还对比了不同数据库系统在处理参数化查询时的细微差异,这种深度在其他同类书籍中极为罕见。这本书真正做到了从攻击者的思维去重构防御体系,对于想要提升自己安全意识的开发者来说,简直是一本不可多得的“武功秘籍”。

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最近迷上了古典音乐的鉴赏,购入了《管弦乐队配器法深度解析》。我原本以为这会是一本枯燥的技术手册,充满了音高、音区、力度记号的枯燥表格。然而,这本书的视角却非常独特和人性化。它没有止步于简单的乐器介绍,而是着重探讨了不同乐器组合在一起时所产生的“化学反应”。作者会用非常形象的语言描述铜管组的“辉煌”与木管组的“灵动”是如何互相衬托的,比如他描述巴松管在中低音区如何像一块深色的天鹅绒,为整体音响铺垫出温暖的底色,这种文学性的描绘极大地激发了我的想象力。此外,书中大量的配器实例都选取了勃拉姆斯、马勒等大师的经典片段,并附有详细的乐谱分析(虽然我看不懂全部五线谱,但对照文字描述也能领略一二)。更棒的是,这本书似乎还考虑到了现代听众,它巧妙地将古典配器的原理与现代电影配乐的技巧进行了对比,让我对不同时代音乐制作的共通性有了全新的理解。这是一本真正能让你“听”出乐器背后设计意图的书。

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